[发明专利]DNA甲基化检测方法及相关应用

权利要求书

1.一种DNA甲基化检测试剂盒，所述试剂盒用于胃癌的诊断，其特征在于所述试剂盒中包含：

(1)对待测DNA进行转化处理的试剂，所述试剂包括亚硫酸氢盐和/或重亚硫酸盐；

(2)用于待测DNA扩增和检测的试剂，其中所述待测DNA为Reprimo基因，所述试剂包括用于扩增和检测Reprimo基因的上游引物、下游引物和检测探针，所述上游引物、下游引物和检测探针的序列分别为SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25；

(3)用于检测内参基因ALU-C4的试剂，其包括用于扩增ALU-C4的正向引物和反向引物以及ALU-C4检测探针，所述正向 引物、反向 引物和检测探针的序列分别为SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29，和

(4)阻断剂，其中所述阻断剂序列为SEQ ID NO:26，且所述阻断剂的3’端基团使得所述阻断剂在DNA扩增时无法被延伸。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述阻断剂的3’端基团选自磷酸基团、间隔子C3(Spacer C3)、间隔子C9(Spacer C9)、间隔子18(Spacer 18)中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述检测探针用标记物标记。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述标记物为荧光标记物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括PCR反应试剂、阳性对照品和/或阴性对照品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述PCR反应试剂包括DNA聚合酶，所述阳性对照品为Reprimo合成DNA，所述阴性对照品为纯化水。

7.(1)对待测DNA进行转化处理的试剂、(2)用于待测DNA扩增和检测的试剂、(3)用于检测内参基因ALU-C4的试剂和(4)阻断剂在制备DNA甲基化检测试剂盒中的用途，所述试剂盒用于胃癌的诊断，所述待测DNA为Reprimo基因，其特征在于:

所述(1)对待测DNA进行转化处理的试剂包括亚硫酸氢盐和/或重亚硫酸盐；

所述(2)用于待测DNA扩增和检测的试剂包括用于扩增和检测Reprimo基因的上游引物、下游引物和检测探针，所述上游引物、下游引物和检测探针的序列分别为SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25；

所述(3)用于检测内参基因ALU-C4的试剂包括用于扩增ALU-C4的正向引物和反向引物以及ALU-C4检测探针，所述正向引物、反向引物和检测探针的序列分别为SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29；

所述(4)阻断剂序列为SEQ ID NO:26，且所述阻断剂的3’端基团使得所述阻断剂在DNA扩增时无法被延伸。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述阻断剂的3’端基团选自磷酸基团、间隔子C3(Spacer C3)、间隔子C9(Spacer C9)、间隔子18(Spacer 18)中的一种。

9.根据权利要求7或8所述的用途，其中所述检测探针用标记物标记。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述标记物为荧光标记物。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述试剂盒中包括PCR反应试剂、阳性对照品和/或阴性对照品。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述PCR反应试剂包括DNA聚合酶，所述阳性对照品为Reprimo合成DNA，所述阴性对照品为纯化水。