[发明专利]一种谷氨酸棒杆菌重组菌及其构建方法在审
| 申请号： | 201811074264.6 | 申请日： | 2018-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN109182239A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 徐建中;杨汉昆;张伟国;于海波 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/77;C12R1/15 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 徐洋洋;冯瑞 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组菌 谷氨酸棒杆菌 构建 精确调控 出发菌 基因 应用基因工程 变形链球菌 液体培养基 含量降低 基因工程 酶工程 菌株 敲除 摇瓶 替换 合成 成功 | ||
1.一种谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述重组菌异源表达了NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶icdSm，并敲除了NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶icdCg、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶zwf和苹果酸酶malE。
2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述的NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶来源于变形链球菌Streptococcus mutans。
3.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
6.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述的苹果酸酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
7.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述重组菌的宿主为谷氨酸棒杆菌C.glutamicum lysCfbr。
8.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，所述重组菌以pK18mobsacB作为表达载体。
9.一种权利要求1～8任一项所述的重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)分别构建重组自杀型质粒pK18mobsacB-ΔicdCg::icdSm、pK18mobsacB-△zwf和pK18mobsacB-△malE；
(2)重组菌株C.glutamicum lysCfbrΔzwfΔmalEΔicdCg::icdSm的构建：分别将步骤(1)的三种重组自杀型质粒转化到宿主谷氨酸棒杆菌C.glutamicum lysCfbr中，筛选得到所述的重组菌。
10.权利要求1～8任一项所述的重组菌在饲料工业、医药工业或食品工业中的应用。
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