[发明专利]蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法

权利要求书

1.一种蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）标准溶液的配制：

1.1标准储备液：分别称取多菌灵、甲基托布津和乙基托布津，均用乙腈作溶剂定容在100mL的容量瓶中，配制成质量溶度为100mg/L的标准储备液，然后放在4℃下避光保存；

1.2标准工作液：分别量取所述多菌灵标准储备液、甲基托布津标准储备液和乙基托布津标准储备液，并将三种标准储备液混合均匀，再用乙腈进行稀释，配制成1mg/L和0.1mg/L的混合标准溶液，然后放在4℃下避光保存；

1.3内标储备液：分别称取一定量的内标多菌灵D3和内标吡虫啉D4，用适量甲醇作溶剂，并定容在100mL的容量瓶中，配制成质量浓度为100mg/L的内标储备液，然后放在4℃下避光保存；

1.4内标工作液：分别量取一定量的多菌灵D3内标储备液和吡虫啉D4内标储备液，用甲醇定容，将多菌灵D3内标储备液的质量浓度配制成100ng/L，制成多菌灵D3内标工作液，将吡虫啉D4内标储备液的质量浓度配制成100ng/L，制成吡虫啉D4内标工作液；

（2）蜂王浆前处理：称取2g蜂王浆，放置在离心管中，加入0.1mL吡虫啉D4内标工作液和0.1mL多菌灵D3内标工作液，旋涡混匀，再加入质量浓度为30%的乙醇涡旋使溶液充分溶解，再加入PH值为7.5-8的甘氨酸-盐酸缓冲液15mL，旋涡振荡1min，超声波处理15min；

（3）蜂王浆后处理：用活化后的HLB固相萃取柱，取上清液上样，用5mL水润洗小柱，再用5ml乙腈洗脱，洗脱液在40-45℃下水浴下氮气吹干，用5mL体积比为1：1的乙腈和水溶液溶解并定容至1mL，过0.22um油系微孔滤膜，得滤液；

（4）色谱检测：用SepaxGP-C18色谱柱（150mm×4.6mm，5um）进行检测；

（5）质谱检测：离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描模式；检测模式：多反应检测模式；喷雾电压：3000V；毛细管温度：350℃；雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；雾化气压为450kPa；辅助加热气压：350kPa；气帘气压70kPa，碰撞气压：40kPa。

2.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述PH值为7.5-8的甘氨酸-盐酸缓冲液溶液的配制方法为：取50mL浓度为0.2mol/L的甘氨酸和5ml浓度为0.2mol/L的盐酸，加水稀释至200mL，再用5mol/L的氨水调节至PH值为7.5-8，加水至1000mL。

3.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中小柱润洗后用2mL空气吹干。

4.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中超声波处理后的溶液要在转速为5000r/min，离心半径为6cm的条件下离心5min。

5.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中活化HLB萃取柱的方法为：先用5mL的甲醇活化，再用5mL的水活化。

6.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中加入PH值为7.5-8的甘氨酸-盐酸缓冲液前，加入15g无水硫酸钠，用力振摇6min。

7.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中上样速率为5mL/min。

8.根据权利要求1所述的蜂王浆中多菌灵类成分的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中检测条件为：柱温：30；进样量：20uL；流速：0.25mL/min；流动相：A相为0.5mmoL/L乙酸铵水溶液，含有1%的甲酸，B相为甲醇；采用梯度洗脱方式：0-6.5min，95%A-50%A；6.5-7.5min，50%A-5%A；7.5-12min，5%A；12-12.1min，5%A-95%A；12.1-16min，95%A。