[发明专利]一种诱导巨噬细胞极化并增强其免疫功能的白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白

说明书

本发明涉及微生物学及免疫学领域，具体涉及到一种白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白的制备方法及其用途。从白假丝酵母菌中提纯出一种胞壁多糖a‑(1，6)(1，2)‑甘露糖蛋白，可以刺激巨噬细胞向M1方向活化，通过激活PI3K‑AKT信号通路，巨噬细胞的增殖能力升高，凋亡细胞减少，提高巨噬细胞对病原菌的吞噬能力及杀伤能力，发挥增强免疫的作用。

技术领域

本发明涉及微生物学及免疫学领域，具体涉及到白假丝酵母菌胞壁多糖的提取方法与巨噬细胞免疫功能的活化。

背景技术

白假丝酵母菌是一种双相机会性致病真菌，一般定植于健康人类皮肤、粘膜及生殖道。在正常情况下，其并不能引起疾病，当适当的免疫识别功能及应答机制缺陷时，机体不能控制白假丝酵母菌的定植及侵袭，引起一系列的疾病，包括浅表的粘膜真菌感染、播散性白假丝酵母菌病、慢性粘膜皮肤白假丝酵母菌病及系统性的感染。

白假丝酵母菌侵袭皮肤很快可被固有免疫受体识别，例如模式识别受体（PRRs），可开启有效的免疫应答。不同的真菌结构例如细胞壁组分β-葡聚糖，甘露聚糖及磷脂甘露聚糖可以被不同种类的模式识别受体感知，其中包括Toll样受体及C型凝集素。它们对宿主抵御假丝酵母菌种属是组织特异性并取决于真菌形态。Dectin-1是C型凝集素的一种，在不同细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞及中性粒细胞。它识别真菌胞壁成分β-葡聚糖，并参与Th17诱导的Syk-及Card9-依赖模式下表皮抗真菌防御。Langerin是表皮朗格汉斯细胞特异性表达的，也具有识别白假丝酵母菌的功能。

巨噬细胞作为皮肤抵抗外界微生物的前哨细胞，其Toll样受体可识别白假丝酵母菌的胞壁多糖，包括TLR2可识别磷脂甘露聚糖，TLR4可识别O连接甘露聚糖。TLR的活化触发了细胞内信号通路，包括MAPK、 NFκB等信号通路，导致TNFa、白介素6 和/或干扰素1型的转录和分泌。也可通过Dectin-1识别细胞壁β-葡聚糖，激活Syk、 PI3K等信号通路，实现吞噬作用及过氧化物的产生。

巨噬细胞对病原体及其他有害刺激进行应答，例如凋亡或坏死的细胞碎片，并能激活免疫反应。巨噬细胞的活化是通过信号转导至下游Toll样受体及细胞因子受体。活化后的巨噬细胞产生促炎细胞因子，促进细胞的迁移及刺激因素的消解。在炎症后期，巨噬细胞参与炎症的减轻，促进组织的重塑。在炎症刺激及细胞环境的作用下可向促炎方向M1极化，或者向抑炎方向M2极化。巨噬细胞的活化是一个精密调节的过程，由受体刺激或细胞内调控蛋白介导的信号级联放大反应决定的。其中，PI3K-AKT信号通路及其下游的靶点是巨噬细胞表型活化的重要调节因子，与细胞增殖与分化、细胞形态维持、细胞骨架的构建、细胞凋亡和细胞的癌变等多种生物学反应。

白假丝酵母胞壁多糖a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白对于固有免疫细胞，尤其是前哨细胞—巨噬细胞的作用尚无深入的研究，而巨噬细胞对a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白的应答尚无明确结果，进而巨噬细胞的活化方向及涉及的相关信号通路尚需探索。巨噬细胞作为固有免疫中发挥重要作用的前哨细胞，在白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白的作用下，其活化机制尚需完善。目前，白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白尚未作为免疫增强剂被探索研究，而充分了解巨噬细胞在甘露糖蛋白作用下的极化方向，有助于为小分子药物的开发与推广提供基础。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明从白假丝酵母菌中提纯出一种胞壁多糖a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白，可以刺激巨噬细胞向M1方向活化，通过激活PI3K-AKT信号通路，巨噬细胞的增殖能力升高，凋亡细胞减少，提高巨噬细胞对病原菌的吞噬能力及杀伤能力。此免疫增强效应可以将a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白作为免疫增强剂，通过刺激巨噬细胞的大量增殖及减少凋亡，产生大量ROS及促炎细胞因子例如白介素-1β、白介素-6、TNF-α来提高机体对病原体的抵抗能力。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案。