[发明专利]一种诱导巨噬细胞极化并增强其免疫功能的白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白

权利要求书

1.一种诱导巨噬细胞极化并增强其免疫功能的白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白，其特征在于：该甘露糖蛋白是从白假丝酵母菌(ATCC11006)的菌体中提取得到的白假丝酵母菌胞壁多糖a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白。

2.根据权利要求1所述的白假丝酵母菌胞壁甘露糖蛋白，其特征在于：其制备方法具体步骤如下：

步骤1. 粗品提取：

1）菌株活化后于沙氏培养基中，培养每48小时传代一次，后接种于YEPD培养基（酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%、硫酸腺嘌呤0.005%），在30℃、200rpm恒温恒速孵箱内培养48小时，菌液经离心后沉淀；

2）将离心沉淀后的菌体冷冻干燥，得到干燥的菌体，再将冻干的菌体用3% NaOH溶液于100℃提取3h，离心得上清液，残渣用3% NaOH溶液于100℃再提取两次，每次3h，合并上清液；上清液用6mol/L HCl中和至中性，离心后，上清液浓缩，透析（截留分子量 3500Da），透析內液减压浓缩，离心，上清液冻干得粗多糖，代号为CABⅠ；

3）上述透析内液中出现不溶物，离心后收集沉淀，冻干得沉淀，代号为CABII，将CABⅡ于85℃加热15min，溶于3% NaOH溶液，离心除去不溶物，上清液调pH中性，出现凝胶状不溶物，将其置透析袋中透析，然后将透析内液离心，沉淀和上清液分别冻干，得沉淀部分，代号为CABⅡ-A；及上清液部分，代号为CABⅡ-B，其中CABⅡ-A为碱溶水不溶的多糖组分；

步骤2. 分离纯化：

采用20mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲液冲洗柱子，用约30ml DEAE-Sepharose FF湿胶装柱，待分层后，倒去乙醇溶液，再次加入20mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲液；装柱后，使用去离子水冲洗柱子，速度约为1ml/min，平衡时间为 5h以上，直至液相层析系统记录器显示为基准线；取粗多糖CABⅠ溶解于去离子水中，离心后上清液上柱，依次用去离子水、0.1mol/L、0.2mol/L和0.4 mol/L氯化钠溶液洗脱，分别收集四部分的洗脱液，合并洗脱液，浓缩至干，得浓缩物；其中用0.1mol/L氯化钠溶液洗脱得到的成分，代号为CABⅠ-B1，即为白假丝酵母菌胞壁多糖a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白。

3.白假丝酵母菌胞壁多糖a-(1，6)(1，2)-甘露糖蛋白具有诱导巨噬细胞极化，并增强其免疫的功能。

4.如权利要求3所述的诱导巨噬细胞极化并增强其免疫功能，其特征在于：是通过AKT信号通路的激活，使巨噬细胞大量增殖并抑制其凋亡，向M1方向活化，产生促炎症细胞因子，产生一氧化氮及过氧化物以杀灭病原体，进而增强固有免疫的免疫效应，实现其作为免疫增强剂的研发基础。