[发明专利]对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法在审
申请号: | 201811055318.4 | 申请日: | 2018-09-12 |
公开(公告)号: | CN109297960A | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 曹智新 | 申请(专利权)人: | 山东省立医院 |
主分类号: | G01N21/84 | 分类号: | G01N21/84 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 250000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 神经元 小鼠耳蜗 细胞 体视学 切片 病理分析 数据处理系统 显微成像系统 显微摄像系统 形态结构分析 耳蜗神经元 计算机分析 毛细胞损伤 输入计算机 定量分析 二维平面 频率位置 三维形态 染色 体视 显微镜 成像 计算机 | ||
1.一种对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取材:收集小鼠耳蜗组织,对小鼠耳蜗组织进行切片,切取成若干连续切片,并对切片做化学成分特异染色;
(2)图像拍摄:每张切片在40倍物镜下的病理区域随机捕获3~5视野,在再100倍物镜下清晰聚焦后等距随机选择视野拍照,在每一张切片上相同部位获取照片,经显微摄像系统输入计算机,相邻的两个组织切片构成一个体视框,前一张作为对照平面,后一张作为测试平面,两者之间高度为8μm;
(3)神经元数目和毛细胞数目计算:在对照平面和测试平面一个视野的固定位置叠放无偏计数框,依照体视框的计数原则计数神经元的和毛细胞的数目;
(4)定量分析:用体视学软件对耳蜗神经元和毛细胞损伤丢失和所处频率位置进行定量分析,采用体视学方法计数,达到小鼠耳蜗神经元和毛细胞数目。
2.根据权利要求1所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,所述切片的厚度为3~5μm。
3.根据权利要求1所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,体视学设备包括一台显微镜,所述显微镜上装置有能够控制镜下的视野在X轴和Y轴精确移动的控制器,连接到电脑显示器的摄像仪,能够精确测量聚焦深度的指针测微器和能够完成精确技术的物镜。
4.根据权利要求1所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,神经元数目的计算公式为:
N(total)=∑Q-×1/ssf×1/asf×1/tsf
其中,∑Q-代表所测区域运算体视框最后计数的神经元总数;
ssf-为切片抽样分数;
asf-所测区域神经元的面积抽样分数;
tsf-为所测区域神经元的厚度抽样分数。
5.根据权利要求1所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,所述切片包括组织截面区域分析切片、组织细胞量化分析切片。
6.根据权利要求5所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,所述组织截面区域分析切片上设置有等距离纵横交叉的线条,线条的间隔为10μm,形成中等十字网格,即单元格面积为100μm2,用于定位分析、计算组织截面积,定位、计数不同视野下组织区域。
7.根据权利要求5所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,所述组织细胞量化分析切片上设置有等距离纵横交叉的线条,线条的间隔为5μm,形成细微十字网格,单元格面积为25μm2,用于定位分析组织区域或薄膜表面内特定细胞的数目和数密度、面积密度等几何学参数。
8.根据权利要求5所述的对小鼠耳蜗神经元和毛细胞进行病理分析的体视学方法,其特征在于,所述十字网格、平行网格、辐射状网格和非连续线段的区域大小都以覆盖各自切片的25mm×25mm表面积为标准。
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