[发明专利]一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1

说明书

本发明公开了一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1，所述双向启动子SCP1的核苷酸序列是用SEQ ID NO.1所示；或与所述SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列。在构建基因表达载体时，质粒设计时要加入启动子序列，以保证目的基因的表达。而双向启动子被放置于两个ORF之间可同时表达两个ORF。由于两个ORF分别有自己的起始密码子和终止密码子，所以会翻译两个独立的、没有经过修饰的蛋白，不会带来多启动子载体中启动子相互干扰或抑制的问题，从而达到高效表达目的基因的作用。在天蓝色链霉菌中还未有双向启动子的相关报道，本发明提供一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1，可大大提高基因的表达效率。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1及含有所述启动子的一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1的重组载体。

背景技术

启动子(Promoter)是指位于基因转录起始位点上游、能够与RNA聚合酶和其它转录因子结合并进而调节其下游目的基因转录起始和转录效率的一段DNA序列。启动子在用于设计和制备基因工程产品等方面，具有重要的应用价值。当相反方向转录的两个基因相邻的转录起始位点(transcription start site，TSS)之间的距离低于1kb左右时，这段基因间DNA序列可称之为“双向启动子(bidirectional promoter)”。双向启动子属于一种特殊类别的启动子，该类启动子能够同时驱动其两侧邻近的转录方向相反的两个基因的转录。与传统的单向启动子相比，双向启动子在具体应用时，不仅可以实现单个外源基因的表达，还可以实现两个外源基因的同时表达，因此在用于设计和制备基因工程产品等方面具有更为重要的价值。

在转基因过程中由于重复序列的出现会引起基因沉默现象，尤其是进行多个基因导入时，这种现象会更严重。而在进行两个或两个以上基因导入时，通常需要这些基因的表达量、表达时间的同一性，进而确保转入基因行使正常的功能，使用单向启动子很难达到这样的要求。这些都是基因工程中亟待解决的问题。随着基因组学的发展，多种生物基因组测序已完成，经过生物信息学分析人们发现了双向启动子的存在，这为我们利用天蓝色链霉菌自身的双向启动子进行操作，从而避免多基因插入引起的基因沉默现象提供了可能。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1。

本发明的第二个目的是提供一种含有一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1的重组载体。

本发明的技术方案概述如下：

一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1，所述双向启动子SCP1的核苷酸序列是用SEQID NO.1所示；或与所述SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

含有一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1的重组载体，用下述方法构建：

(1)用细菌基因组DNA提取试剂盒提取天蓝色链霉菌M145基因组；

(2)以基因组DNA为模板，以SCP1-F，SCP1-R为引物进行PCR扩增，所述SCP1-F的核苷酸序列用SEQ ID NO.2所示，所述SCP1-R的核苷酸序列用SEQ ID NO.3所示；

(3)PCR产物经1.5％的琼脂糖凝胶检测，用凝胶回收试剂盒回收目的片段双向启动子SCP1,所述目的片段双向启动子SCP1的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示；

(4)在所述双向启动子SCP1的两侧用融合PCR的方法连接上目的基因，得到融合片段，将所述融合片段连接在质粒上，得到含有一种天蓝色链霉菌双向启动子SCP1的重组载体。

优选的是，目的基因为绿色荧光蛋白基因eGFP，所述绿色荧光蛋白基因eGFP的核苷酸序列用SEQ ID NO.4所示，还可以选用其它基因。

所述质粒优选为pACYCDuet-1，还可以选用其它质粒。