[发明专利]一种甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒

权利要求书

1.一种甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，包括微孔板、与所述微孔板匹配的微孔板盖、可拆卸地设置在所述微孔板底部的主电磁吸盘、连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠和5’端带荧光标记的反向引物；所述微孔板包括多个微孔；所述微孔包括彼此连通的上混合区和下分选区；所述微孔的底部内侧设置有底部凸起，使得下分选区的顶面面积小于下分选区的最大横截面面积；所述微孔板盖上设置有与所述微孔的内径匹配的环形凸起；所述微孔板与所述微孔板盖被设置为可放置入PCR仪中，起到代替PCR管和PCR架的作用；

所述磁珠连接正向引物由5’端的连接分子和3’端的核心引物组成；所述连接分子为-NH₂-(CH₂)n-，n=4-8；所述核心引物的序列如SEQ ID NO.1到SEQ ID NO.3所示；所述5’端带荧光标记的反向引物的序列如SEQ ID NO.4到SEQ ID NO.6所示；其中，SEQ ID NO.1所示的序列和SEQ ID NO.4所示的序列来自甲型流感病毒H1N1亚型，SEQ ID NO.4所示的序列的5’端的荧光标记是CY5；SEQ ID NO.2所示的序列和SEQ ID NO.5所示的序列来自甲型流感病毒H5N1亚型，SEQ ID NO.5所示的序列的5’端的荧光标记是VIC；SEQ ID NO.3所示的序列和SEQ ID NO.6所示的序列来自甲型流感病毒H7N9亚型，SEQ ID NO.6所示的序列的5’端的荧光标记是FAM；

还包括辅助引物；所述辅助引物的序列如SEQ ID NO.7到SEQ ID NO.9所示，其中SEQID NO.7所示的序列来自甲型流感病毒H1N1亚型；SEQ ID NO.8所示的序列来自甲型流感病毒H5N1亚型；SEQ ID NO.9所示的序列来自甲型流感病毒H7N9亚型；

所述5’端带荧光标记的反向引物与所述辅助引物的物质的量的比例为10~20: 1；

所述微孔板盖的顶面可拆卸地设置有辅电磁吸盘。

2.如权利要求1所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，还包括H1N1亚型阳性对照模板、H5N1亚型阳性对照模板和H7N9亚型阳性对照模板；所述H1N1亚型阳性对照模板为带有如SEQ ID NO.10所示的DNA序列的质粒；所述H5N1亚型阳性对照模板为带有如SEQ ID NO.11所示的DNA序列的质粒；所述H7N9亚型阳性对照模板为带有如SEQID NO.12所示的DNA序列的质粒。

3.如权利要求1所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，还包括RT-PCR试剂，所述RT-PCR试剂来自天根一步RT-PCR试剂盒。

4.如权利要求1所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，所述微孔的孔壁突出于所述微孔与相邻所述微孔之间的第一连接区域以及所述微孔与所述微孔板侧壁之间的第二连接区域。

5.如权利要求1所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，还包括盒体和与所述盒体的内壁贴合的支架；所述支架上设置有微孔板槽、微孔板盖槽、主电磁吸盘槽、辅电磁吸盘槽和若干试剂瓶槽。

6.如权利要求5所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶槽的数量是6个，对应地用于放置装盛连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠的试剂瓶、辅助引物的试剂瓶、5’端带荧光标记的反向引物的试剂瓶、H1N1亚型阳性对照模板的试剂瓶、H5N1亚型阳性对照模板的试剂瓶和H7N9亚型阳性对照模板的试剂瓶；连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠的试剂瓶内为等质量比混合的核心序列如SEQ ID NO.1所示的磁珠、核心序列如SEQ ID NO.2所示的磁珠和核心序列如SEQ ID NO.3所示的磁珠；辅助引物的试剂瓶内为等物质的量比混合的3种基因序列，其序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；5’端带荧光标记的反向引物的试剂瓶内为等物质的量比混合的5’端分别标记了CY5、VIC和FAM的3种基因序列，其序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示。

7.如权利要求5所述的甲型流感病毒亚型分型检测高通量试剂盒，其特征在于，所述支架上还设置有RT-PCR试剂槽。