[发明专利]一种关节软骨玻璃化冷冻保护液及制备方法

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了一种关节软骨玻璃化冷冻保护液及制备方法。所述的关节软骨玻璃化冷冻保护液包括以下重量份数的组分：二甲基亚砜200‑300份、角鲨烯25‑60份、分心木多糖20‑35份、四氢澳洲茄胺12‑25份、虾青素2‑7份、水10‑30份。本发明的关节软骨玻璃化冷冻保护液通过角鲨烯、分心木多糖和其他原料发生协同作用，通过实验验证，可有效提升关节软骨的细胞存活率，在第8周将关节软骨复温后，关节软骨的细胞存活率依然可达76%，在第10周将关节软骨复温后，关节软骨的细胞存活率依然可达71%；制备工艺简单，有利于实现工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种关节软骨玻璃化冷冻保护液及制备方法。

背景技术

关节软骨在关节活动中起重要作用。然而，人到一定年龄，人的关节纤维变性、弹性减弱，关节软骨的延伸能力逐渐弱化，恢复原状的能力减弱；关节软骨就容易受到损伤、磨损。软骨移植是目前治疗软骨损伤的十分有前景的修复方法之一。

伴随着低温保存技术的不断发展，研究表明，在低温环境中的离体关节软骨会逐渐减缓其新陈代谢，甚至停止新陈代谢，因此能够使其得以长期保存。但是目前对适用于关节软骨的玻璃化冷冻保护液的研究较少。且采用现有的关节软骨玻璃化冷冻保护液保存关节软骨，在冷冻保存第8周时关节软骨的细胞存活率仅有68％左右，仍需进一步提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种关节软骨玻璃化冷冻保护液及制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种关节软骨玻璃化冷冻保护液，所述的关节软骨玻璃化冷冻保护液包括以下重量份数的组分：二甲基亚砜200-300份、角鲨烯25-60份、分心木多糖20-35份、四氢澳洲茄胺12-25份、虾青素2-7份、水10-30份；

所述的分心木多糖的制备方法为：用质量分数为3-4％的氢氧化钠溶液提取分心木，得到的提取液中加入胃蛋白酶进行酶解，然后用三氯乙酸去除蛋白，所得物再用质量分数为70-75％的乙醇进行重结晶，即得分心木多糖。

作为本发明进一步的方案：所述的关节软骨玻璃化冷冻保护液包括以下重量份数的组分：二甲基亚砜230-270份、角鲨烯35-50份、分心木多糖25-32份、四氢澳洲茄胺15-22份、虾青素3-5份、水14-26份。

作为本发明进一步的方案：所述的关节软骨玻璃化冷冻保护液包括以下重量份数的组分：二甲基亚砜250份、角鲨烯42份、分心木多糖28份、四氢澳洲茄胺18份、虾青素4份、水22份。

一种关节软骨玻璃化冷冻保护液的制备方法，包括以下步骤：

(1)取分心木多糖、角鲨烯和二甲基亚砜混合，超声震荡处理5-10min后，混合物置于75-85℃下搅拌反应4-6h，搅拌速度为400-600r/min；

(2)将上步所得物置于0-5℃下静置20-30h；然后与四氢澳洲茄胺、虾青素混合，置于85-95℃下搅拌反应20-35min，搅拌速度为800-1000r/min；

(3)上步所得物先采用Co60-γ辐射源进行辐射处理，辐照剂量为20-30GY；再进行紫外线照射处理，照射强度为50-100μW/cm；

(4)将上步所得物与水混合均匀后，置于-50℃至-10℃下冷冻10-20h，再置于室温下静置1-5h，即得关节软骨玻璃化冷冻保护液。

作为本发明进一步的方案：步骤(1)取分心木多糖、角鲨烯和二甲基亚砜混合，超声震荡处理7min后，混合物置于78℃下搅拌反应5h，搅拌速度为500r/min。