[发明专利]一种淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法在审
| 申请号： | 201811046039.1 | 申请日： | 2018-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN109055595A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 段媛媛;郭杰;游景茂;周武先;郭晓亮;卢超 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院中药材研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 445000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 淫羊藿 分子标记 引物 遗传多样性分析 扩增条带 良种选育 多态性 扩增 嫩叶 节约 清晰 应用 优化 | ||
1.一种淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1，采集淫羊藿的嫩叶，提取植物组DNA；
步骤2，采用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性；
步骤3，采用引物及ISSR-PCR反应体系对步骤1提取的DNA样品进行扩增。
2.如权利要求1所述的淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，步骤3中ISSR-PCR反应体系为：20μL的反应体系中含有2×Taq Master Mix 9.8μL，模板DNA 30ng，引物0.325μM。
3.如权利要求1或2所述的淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，步骤3中ISSR-PCR扩增程序为：94℃预变性4min，94℃变性1min，46.8～65℃退火40s，72℃延伸40s，循环40次，72℃再延伸5min，4℃保存。
4.如权利要求3所述的淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，步骤3中引物为：
UBC808，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1；
或UBC814，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.2；
或UBC826，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.3；
或UBC827，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.4；
或UBC840，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.5；
或UBC846，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.6；
或UBC856，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.7。
5.如权利要求4所述的淫羊藿ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，步骤3中引物在ISSR-PCR扩增中优化后的退火温度，具体如下：UBC808 60.3℃；UBC814 46.8℃；UBC82660.3℃；UBC827 65℃；UBC840 52.4℃；UBC846 54.3℃；UBC856 54.3℃。
6.一种引物，其特征在于，所述引物用于标记淫羊藿ISSR-PCR分子，所述引物为：
UBC808，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1；
或UBC814，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.2；
或UBC826，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.3；
或UBC827，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.4；
或UBC840，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.5；
或UBC846，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.6；
或UBC856，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.7。
7.如权利要求6所述的引物，其特征在于，所述引物在ISSR-PCR扩增中优化后的退火温度，具体如下：UBC808 60.3℃；UBC814 46.8℃；UBC826 60.3℃；UBC827 65℃；UBC840 52.4℃；UBC846 54.3℃；UBC856 54.3℃。
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