[发明专利]靶向前列腺癌的重组溶瘤腺病毒及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向前列腺癌的重组溶瘤腺病毒Onco^Ad‑DD3‑E1A‑△E1B‑mK5，所述重组溶瘤腺病毒由DD3启动子驱动腺病毒E1A基因，腺病毒基因组敲除了E1B基因区域，同时，插入外源基因mk5。本发明还公开了所述重组溶瘤腺病毒的构建方法及其在制备治疗前列腺癌药物中的应用。采用本发明的构建方法获得的重组溶瘤腺病毒具有毒性低、抗前列腺癌效果好，且对抗癌药物多西他赛起到协同增效作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是关于一种靶向前列腺癌的重组溶瘤腺病毒及其构建方法和应用。

背景技术

对于早期前列腺癌，多采用外科手术的方法切除肿瘤，效果也较好。然而由于前列腺癌相较其它癌症发病隐匿，生长较为缓慢，潜伏期和平均倍增时间较长等特点，多数前列腺癌病人就诊时病变已至晚期阶段。此时手术的方法已不可行，多采用以降低雄激素水平为主的内分泌治疗方式。这种方式初期是有效的，但随着治疗的进行，前列腺癌会慢慢进展为雄激素非依赖性，对这一治疗手段不再敏感。

除此之外还有传统的放化疗手段，但都存在疗效差，副作用高的缺点，除可一定程度上缓解患者的症状之外，不能有效的延长患者的生存时间。

多西他赛(Docetaxel)，又称多西紫杉醇，是紫杉烷类的成员，是一类与微管蛋白结合的细胞毒性化学治疗剂，从而稳定微管并引起细胞周期停滞和凋亡。多西他赛是一种经典的广谱抗肿瘤药物，广泛用于多种癌症的治疗，己成为治疗晚期前列腺癌的一线化疗药物。然而因患者自身耐受差、药物选择性弱等原因亦导致化疗失败或复发，使其疗效欠佳。

血管新生(angiogenesis)是一项牵涉颇广的生理机能。除某些正常生理情况外，很多病理情况也涉及血管新生，如伤口愈合、糖尿病增殖性视网膜病变、动脉粥样硬化、肿瘤生长等。就肿瘤而言，研究表明其生长与转移均依赖于血管生成。肿瘤生长初期不需要血管新生，但生长至l～2mm³后，再继续增长就必须靠血管新生供给充足的营养才能维持。血管形成愈丰富，肿瘤生长愈旺盛。肿瘤不仅借助新生血管获得充分的营养和氧气供给，带走代谢废物；肿瘤的转移和扩散也是通过血管进行的。

当前应用于抗肿瘤的血管新生抑制剂有一类属于大分子蛋白的水解产物，比如已应用于临床的内皮抑素(endostatin)和血管抑素(angiostatin)，它们分别是collagenXVIII和纤溶酶原的水解产物。纤溶酶原是溶解纤维蛋白和溶解血栓过程中关键的酶原前体之一，结构上由7个紧密相连、相互协调的结构域组成，包括5个同源性很高的饼环状结构域kringle1～5，这5个kringle环的蛋白质一级结构有50％左右的同源性。血管抑素包含纤溶酶原的前四个Kringle，具有特异性抑制内皮细胞增殖和新生血管形成的作用，在体内外的肿瘤模型试验均已证实了血管抑素通过抑制肿瘤血管生长能够有效的抑制肿瘤生长。后来，Cao等人又发现纤溶酶原第5个饼环区(kringle 5)具有较angiostatin更强的抑制内皮细胞增殖和迁移的能力，可更有效的抑制由生长因子诱导的新生血管增殖，并能诱导部分肿瘤细胞凋亡，对病理性血管新生疾病及肿瘤的生长转移有着明显的治疗效果。然而，当前对纤溶酶原及其饼环结构域的结构还了解甚少，尤其是结构与其功能的关系。Chang等人构建了一个K5的LBS区点突变L71R，发现当K5第71位的亮氨酸突变为碱性氨基酸精氨酸后，对ω-氨基酸配体如赖氨酸类似物EACA的亲合力明显提高。但这种突变的K5(又称mK5)在癌症治疗应用领域研究较少。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种靶向前列腺癌的重组溶瘤腺病毒Onco^Ad-DD3-E1A-△E1B-mK5。

本发明的第二个目的是提供一种所述的靶向前列腺癌的重组溶瘤腺病毒Onco^Ad-DD3-E1A-△E1B-mK5的构建方法。