[发明专利]人原代肝癌组织的体外模型的建立方法有效
| 申请号： | 201811040185.3 | 申请日： | 2018-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN109112106B | 公开（公告）日： | 2022-01-04 |
| 发明（设计）人： | 黄朝峰;赵擎宇;刘忠华;尹萌;陈焕鹏;李永超 | 申请（专利权）人： | 广州长峰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 广州专理知识产权代理事务所(普通合伙) 44493 | 代理人： | 曲超 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人原代 肝癌 组织 体外 模型 建立 方法 | ||
【权利要求书】：
1.人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述的建立方法主要包括以下步骤：
1)收集5份经手术切除的新鲜肝癌组织标本；
2)将所述肝癌组织暂时置于预冷的含抗生素的培养液中储存；培养液为无血清RPMI-1640培养液；
3)然后于2h内完成低温运输并准备进一步处理；
4)在无菌操作台内，将从步骤2)的培养液中取得的肝癌组织切成米粒大小；
5)所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板内；随后在48孔板中加入培养基，再添加调节激酶抑制剂PD98059；培养基中还添加有人工基质胶；
6)所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，通过免疫荧光染色检测组织凋亡情况；
7)每张切片均在荧光显微镜下取三个视野；
8)通过Image J软件统计各组平均光密度；
9)通过GraphPad Prism软件进行统计分析。
2.根据权利要求1所述的人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述用于步骤1)的肝癌组织标本大小为3cm3。
3.根据权利要求1所述的人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述步骤5)的每个孔板加入400ul培养基，每三天换一次液，并置于5％CO2、37℃的恒温箱中培养2个月。
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