[发明专利]一种血脊髓屏障OGD/R损伤模型及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）脊髓来源的混合胶质细胞原代培养；

2）脊髓来源的微血管内皮细胞的原代培养；

3）利用transwell共培养体系建立体外BSCB模型：将融合后的脊髓来源的混合胶质细胞用胰酶消化，脊髓来源的微血管内皮细胞用ACCUTASE消化，离心后，将重悬的微血管内皮细胞接种于transwell上室内，混合胶质细胞接种于transwell底室，待细胞贴壁后，予换液；

4）血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建：待细胞90%以上融合后，将所有培养基弃去，更换成无糖无血清的培养基，transwell置于缺氧培养箱中，培养3h后取出，重新更换为原培养基，在普通细胞培养箱中进行复氧即得脊髓屏障OGD/R损伤模型。

2.根据权利要求1所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤1）的混合胶质细胞包括星形胶质细胞和小胶质细胞。

3.根据权利要求1所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤2）脊髓来源的微血管内皮细胞的原代培养步骤如下：

a）将脊髓组织机械消化离心收集沉淀，离心后的沉淀在预热的ACCUTASE中消化，37℃水浴中震荡30min；

b）消化后的组织离心，沉淀重悬于BSA终止消化；

c）离心后，将上层吸除，沉淀物包含血管段，用HBSS清洗多遍；

d）离心后沉淀即为获得的脊髓微血管内皮细胞，用ACCUTASE消化，37℃，30min；

e）加入含血清培养基终止消化，离心；

f）步骤e）离心后的沉淀物冲洗，重悬于含血清培养基，接种于细胞培养瓶中，细胞融合90%后予传代。

4.根据权利要求3所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤e）和步骤f）中的含血清培养基为：DMEM/F12，10~20%胎牛血清，1%青霉素-链霉素混合液，ECGF 30ng/ml。

5.根据权利要求1所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤3）中的缺氧培养箱中的培养条件是37℃、5%CO₂、95%N₂。

6.根据权利要求1所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型的构建方法，其特征在于，所述步骤3）中的复氧时间为3~48h。

7.权利要求1~6所述的构建方法获得的血脊髓屏障OGD/R损伤模型。

8.权利要求7所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型在筛选保护或治疗血脊髓屏障损伤药物中的应用。

9.权利要求7所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型在制备诊断血脊髓屏障损伤的试剂中的应用。

10.权利要求7所述的血脊髓屏障OGD/R损伤模型在制备保护或治疗血脊髓屏障损伤的药物中的应用。