[发明专利]一种图书馆用的绿色无污染抗菌肽及其制备与应用

说明书

本发明公开了一种图书馆用的绿色无污染抗菌肽及其制备与应用，属于生物技术及抗菌技术领域。本发明的抗菌肽Pc‑Crustin 4与Pc‑Crustin 5来源于淡水小龙虾，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示，其制备包括如下步骤：提取淡水小龙虾总RNA作为模板，进行反转录获得cDNA；以cDNA作为模板进行PCR扩增获得含抗菌肽编码序列的核苷酸片段，扩增产物与表达载体通过酶切、连接、转化，构建可表达重组抗菌肽的大肠杆菌工程菌，大肠杆菌工程菌通过诱导培养，表达出重组抗菌肽。本发明的抗菌肽(尤其是两者复合)具有良好的抑菌、除菌活性，特别适用于图书馆的防霉、除菌。

技术领域

本发明涉及生物技术及抗菌技术领域，具体涉及来源于淡水小龙虾(Procambarusclarkii)的抗菌肽及其制备方法与应用。

背景技术

图书馆是每一所高校必备的功能单位，主要为广大师生提供纸质与电子期刊的借阅服务。因此，它也是各类书刊使用的密集空间。在图书馆这样的公共场所里，具有两个明显的特点，第一，借阅人员的流动性很大，这样给图书馆的环境卫生保持方面造成一定的压力；第二，纸质书籍的借阅对象具有不确定性，其所处环境不可把控，因此，在书籍借阅的流通环节，书籍自身的卫生安全具有一定的隐患。此外，加上图书馆是一个相对密闭的空间，空气的流动性较差，人员往来十分繁杂，这些因素叠加起来之后，会给图书馆的环境卫生造成一定的影响。尤其，对于各类常见的病原菌的控制，应该是图书馆环境卫生治理的重点。图书馆具有一个洁净的环境，细菌、真菌等病原控制在安全范围之内，一方面，对于借阅书籍、期刊的借阅者和在馆内阅读书籍、期刊的读者的身体健康有利，另一方面，洁净的图书馆环境对于书籍的收藏、保护工作也是一个重要保证。

现在对于图书借阅、存储过程中滋生的细菌、真菌在图书馆的书架、地面、角落等处繁殖之后，大多时候采取的是紫外线照射杀菌，这种方式有两个弊端，第一，存在除菌时间的限制，必须闭馆使用紫外线；第二，紫外线杀菌的时候会产生臭氧，污染馆内空气，对于人体健康存在安全风险。因此，开发一种既对环境没有污染，又可以高效除菌的新型图书馆用的除菌剂，将会有良好的应用前景。

发明内容

本发明的首要目的在于提供来源于淡水小龙虾(Procambarus clarkii)的新的抗菌肽。本发明的另一目的在于提供所述抗菌肽的制备方法。本发明的再一目的在于提供所述抗菌肽的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

来源于淡水小龙虾(Procambarus clarkii)的新的抗菌肽，分别命名为Pc-Crustin 4与Pc-Crustin 5蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示，分别为127个和167个氨基酸残基。

进一步地，淡水小龙虾体内，所述抗菌肽Pc-Crustin 4与Pc-Crustin 5蛋白质基因的开放阅读框对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，分别长384bp与504bp。

上述抗菌肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)以提取的淡水小龙虾总RNA作为模板，进行反转录PCR得到cDNA。

(2)以步骤(1)获得的cDNA作为模板，进行PCR扩增获得含上述抗菌肽编码序列(开放阅读框序列)的核苷酸片段。

(3)步骤(2)的扩增产物与原核表达载体通过酶切、连接、转化，构建可表达重组抗菌肽的大肠杆菌工程菌。

(4)步骤(3)构建的大肠杆菌工程菌通过诱导培养，表达出重组抗菌肽。