[发明专利]从喙果皂帽花中提取的具有抗菌活性的马兜铃内酰胺类化合物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种从喙果皂帽花中提取的具有抗菌活性的马兜铃内酰胺类化合物及其制备方法和应用，从喙果皂帽花根部分离得到了三种新马兜铃内酰胺类化合物，分别为连有2个甲氧基和2个羟基的马兜铃内酰胺（化合物Ⅰ）、3个甲氧基和2个羟基的马兜铃内酰胺（化合物Ⅱ，7位为羟基）、3个甲氧基和2个羟基的马兜铃内酰胺（化合物Ⅲ，7位为甲氧基），化合物Ⅱ和化合物Ⅲ是同分异构体。其中化合物Ⅰ和化合物Ⅱ对蜡状芽孢杆菌有明显的抗菌活性，化合物Ⅰ和化合物Ⅱ对白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)和大肠杆菌(Escherichia coli)有微弱的抑菌活性。

技术领域

本发明属于生物化学医药技术领域，具体涉及一种从喙果皂帽花中提取的具有抗菌活性的马兜铃内酰胺类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

番荔枝科(Annonaceae)皂帽花属(Dasymaschalon)植物，全世界共有16种，分布于亚洲热带地区，作为民间常用药用植物，皂帽花属植物对疟疾、风湿性骨痛等疾病有较好的疗效。近几十年国内外学者对皂帽花属植物粗提物或单体化合物的生物活性进行了筛选，发现皂帽花属植物具有广泛的药理活性，如抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗疟等活性。在对其化学成分研究中分离得到了生物碱、黄酮、环己烯衍生物、番荔枝内酯类、芳香族类等化合物。

喙果皂帽花(Dasymaschalon rostratum Merr.)为番荔枝科(Annonaceae)皂帽花属(Dasymaschalon)植物，是一种生长在山地疏林之中灌木或者小乔木，主要分布在印度、菲律宾以及中国的亚热带地区，在民间主要用于治疗疟疾、风湿性骨痛等疾病。该属植物在我国有3种，分别为黄花皂帽花(D.sootepense)、喙果皂帽花(D.rostratum)和皂帽花(D.trichophorum)，分布在海南及广东西南部等地区。据文献报道，皂帽花属植物中富含生物碱、黄酮、环己烯衍生物、番荔枝内酯、芳香族类等化合物，并表现出抗菌、抗肿瘤等生物活性，但喙果皂帽花根的化学成分及生物活性未见研究报道。

马兜铃内酰胺是皂帽花属植物中典型的一类化学成分，该类化学成分和药理作用的研究一直受到国内外学者的广泛关注。马兜铃内酰胺类化合物具有较好的细胞毒活性、抗菌、抗氧化、抗疟、抗炎、抗血小板凝聚和其他生物活性。本发明为了寻找更好的具有生物活性的单体化合物，对富含马兜铃内酰胺的喙果皂帽花进行了系统的分离，以期为今后皂帽花属的研究提供更好的依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供从喙果皂帽花中提取的具有抗菌活性的含有两个羟基的马兜铃内酰胺类化合物及其制备方法和应用。

实现本发明目的的技术方案是一种从喙果皂帽花中提取的具有抗菌活性的马兜铃内酰胺类化合物，其结构如式Ⅰ所示：

一种如式Ⅰ所述的马兜铃内酰胺类化合物的制备方法，包括以下步骤：

①浸膏提取：将喙果皂帽花根放在通风阴凉处阴干后粉碎，用乙醇溶液在室温下浸泡，将乙醇浸泡的药液进行浓缩提取，得到乙醇浸膏。

②植物浸膏的萃取：将步骤①乙醇提取的粗浸膏分散在蒸馏水中，用乙酸乙酯萃取，合并各次萃取液并减压蒸馏浓缩，得到乙酸乙酯部位的总浸膏。

③将步骤②萃取所得的乙酸乙酯浸膏拌样，通过硅胶柱层析色谱进行分离，乙酸乙酯浸膏用石油醚：乙酸乙酯(100:0–50:50，V/V)以及氯仿-甲醇(100:0–0:100，V/V)混合溶剂浓度递增进行分离，按照每次500mL来收集馏出的组份，通过TLC的检测，合并相似组份，得到Fr.1至Fr.12共12个组份。

④对于步骤③得到的Fr.7组份，Fr.7经正相硅胶柱分离，用石油醚：乙酸乙酯(1:0–0:1,V/V)浓度梯度洗脱得到9个组分(Fr.7-1～Fr.7-9)；对于其中的Fr.7-8组份，Fr.7-8经葡聚糖凝胶柱色谱，分离得到化合物Ⅰ。