[发明专利]一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法

说明书

本发明公开一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，准确称取饲料样品于离心管，加入低浓度酸溶液混匀，静置。离心管中加入丙酮和正己烷，震荡离心后吸取上清液于刻度比色管。重复上述步骤三次，最后一次加入正己烷提取。合并提取液，避光静置。计算提取液中丙酮和正己烷的比例，作为溶剂用于配制虾青素标准溶液。用分光光度计测定饲料虾青素提取液的吸光值。制作虾青素标准曲线，得到虾青素浓度和吸光值的关系公式，根据公式计算饲料样品中虾青素的含量。本发明操作流程简化，试剂种类涉及少；所使用的试剂和仪器设备均为实验室常用，价格较低，降低了检测成本，不需要配备专业昂贵的仪器。

技术领域

本发明涉及一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法。

背景技术

虾青素是一种天然存在的具有最强抗氧化活性的类胡萝卜素，由藻类、细菌、酵母菌和浮游植物产生，虾蟹和鱼类摄食后可表现出红色。虾青素具有左旋、右旋和内消旋三种异构形态，不同来源的虾青素具有不同的异构组成。目前虾青素已普遍应用于动物饲料，宠物和观赏鱼用于毛发和体表的着色，鲑鳟鱼类用于肌肉的着色。但是由于天然虾青素价格昂贵，饲料中仅含有少量天然虾青素，大部分使用人工合成的虾青素。

虾青素含量的检测一般包括两个步骤：虾青素的提取和浓度检测。虾青素的提取方法主要有溶剂提取法和二氧化碳超临界流体萃取法，前者应用较为普遍，后者由于硬件设施要求高而较为少用。虾青素属于具有疏水亲脂性物质，室温下易溶于丙酮、氯仿、二氯甲烷和二甲亚砜等有机溶剂，在各种检测方法的提取步骤中一般需要用到这些溶剂。饲料中虾青素的提取采用相同的原理，但是饲料中杂质较多，水分含量低，即使在高速离心后仍然容易与上层的虾青素提取液混合，不易提取，这是目前饲料中虾青素检测的难点之一。此外，还有酶解法、碱解法、微波辅助提取法、负压空化法等能够提高提取效率的辅助提取方法，这些方法一般适用于藻类和虾蟹壳中虾青素的提取。

虾青素的检测方法目前有分光光度计法、高效液相色谱法、光镊拉曼光谱法、高效薄层析色谱法和高虾青素的LC-MS分析法，其中高效液相色谱法为目前最常用方法，其能够分离不同结构的虾青素，精确度高，国内的检测标准：《SN/T 2327-2009进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法》、《GB/T31520-2015红球藻中虾青素的测定液相色谱法》和《DB23/T 1275-2008饲料中虾青素含量的测定高效液相色谱法》均采用该方法。其他检测方法则比较少用，尤其是后三种方法所涉及的设备仪器较为专业昂贵。但高效液相色谱法所用仪器——高效液相色谱仪的价格也很高，饲料加工或养殖企业很少配备。

分光光度计法所用仪器在实验室较为普遍，但是该方法使用的吸收波长区间还包括少量β胡萝卜素(450nm)等虾青素类似物，因此只能测定近似的虾青素含量，较其他检测方法的精确度低，不适用于色素丰富的原料中虾青素含量的测定，如红球藻和红酵母等藻类。饲料中虾青素类似物的含量一般较低，主要为胡萝卜素类，存在于豆粕等植物类原料中(含量仅为0.2-0.4mg/kg)，对虾青素含量的测定结果影响不大，除非饲料中人为添加虾青素类似物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，该方法操作简单，可用于鲑鳟鱼、观赏鱼和宠物饲料中虾青素含量的检测。

本发明的技术方案如下：

一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、称取粉碎的饲料样品并记为m，单位g，装于离心管中，加入酸溶液，混匀后静置后加入丙酮，震荡后加入正己烷，震荡、离心，溶液从下至上分为3层：依次为饲料沉淀层、丙酮-酸溶液层和丙酮-正己烷层；吸取95％以上最上层溶液于具塞玻璃刻度比色管，避光放置；

(2)、第二次加入丙酮，震荡后第二次加入正己烷，震荡、离心，溶液从下至上分为3层：依次为饲料沉淀层、丙酮-酸溶液层和丙酮-正己烷层；吸取95％以上最上层溶液于具塞玻璃刻度比色管，避光放置；