[发明专利]一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法

权利要求书

1.一种饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）、称取粉碎的饲料样品并记为m，单位g，装于离心管中，加入酸溶液，混匀后静置后加入丙酮，震荡后加入正己烷，震荡、离心，溶液从下至上分为3层：依次为饲料沉淀层、丙酮-酸溶液层和丙酮-正己烷层；吸取95%以上最上层溶液于具塞玻璃刻度比色管，避光放置；

（2）、第二次加入丙酮，震荡后第二次加入正己烷，震荡、离心，溶液从下至上分为3层：依次为饲料沉淀层、丙酮-酸溶液层和丙酮-正己烷层；吸取95%以上最上层溶液于具塞玻璃刻度比色管，避光放置；

步骤（1）和步骤（2）加入的丙酮总体积之50%记为V₁；

（3）、第三次加入正己烷，震荡、离心，溶液从下至上分为3层：依次为饲料沉淀层、丙酮-酸溶液层和丙酮-正己烷层；吸取95%以上最上层溶液于具塞玻璃刻度比色管，避光放置；

步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）加入的正己烷总体积记为V₂；

（4）、合并三次提取液，其体积记为V，单位mL，混匀后避光静置，待测；

（5）、按V₁：V₂的比例配制虾青素标准溶液的溶剂，并称取虾青素标准品溶解于所述标准溶液的溶剂中，定容后作为虾青素储存溶液存放于冰箱；

（6）、取不同剂量的虾青素储存溶液，用V₁：V₂比例的丙酮-正己烷混合溶液稀释，得到不同浓度的虾青素测定溶液，然后在470~500nm波长范围内，以V₁：V₂比例的丙酮和正己烷混合溶剂作为空白试剂调零，利用某一浓度虾青素溶液检测分光光度计的最大吸收波长，依次测定该波长下不同浓度虾青素溶液和饲料虾青素提取液的吸光值，并得到吸光值和虾青素浓度关系标准曲线或者吸光值和虾青素浓度关系式；

（7）、根据吸光值和虾青素浓度关系标准曲线或者吸光值和虾青素浓度关系式得到提取液中虾青素及其类似物浓度C，单位是ug/mL，采用公式①计算饲料中虾青素的含量：

①

S表示饲料中虾青素及其类似物的含量，单位是mg/kg；

所述酸溶液为盐酸溶液或者硫酸溶液。

2.根据权利要求1所述的饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述酸溶液为0.1~0.3mol/L的盐酸溶液或者0.1~0.3mol/L的硫酸溶液。

3.根据权利要求1所述的饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述饲料样品重量和酸溶液体积比为1:3~5。

4.根据权利要求1所述的饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中，丙酮总用量和正己烷总用量的体积比为1:1~2。

5.根据权利要求1所述的饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于丙酮在盐酸溶液和正己烷中的分配比例为1:1。

6.根据权利要求1所述的饲料中虾青素及其结构类似物的检测方法，其特征在于步骤（6）中最大吸收波长为480nm。