[发明专利]野生型特异性阻止探针、检测方法及其用途

权利要求书

1.一种野生型特异性阻止探针，其特征在于，所述探针的结构包括：

1)与待测基因野生型等位基因特异互补结合；

2)3’末端修饰有延伸阻断物；

3)长度为15-25个核苷酸。

2.根据权利要求1所述的野生型特异性阻止探针，其特征在于，所述3’末端修饰有C3spacer或Dideoxy-Cytosine。

3.基于抑制野生型的多重PCR扩增反应体系，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的野生型特异性阻止探针。

4.根据权利要求3所述的多重PCR扩增反应体系，其特征在于，所述反应体系为25ul，包括：

待测基因组，5-10ng，1-10ul；

待测基因的PCR引物，浓度为0.1-0.3uM，2.5ul；

权利要求1-2任一项所述的野生型特异性阻止探针，2uM，2.5ul；

Q5高保真聚合酶，0.25U，0.25ul；

dNTPs，浓度为10mM，0.5ul；

ddH₂O，补足至25ul。

5.基于抑制野生型的多重PCR反应试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的野生型特异性阻止探针和/或权利要求3-4任一项所述的基于抑制野生型的多重PCR扩增反应体系。

6.一种基于抑制野生型的多重PCR检测突变基因的方法，其特征在于，包括利用权利要求1-2任一项所述的野生型特异性阻止探针、权利要求3-4任一项所述的基于抑制野生型的多重PCR扩增反应体系和/或基于抑制野生型的多重PCR反应试剂盒对含有突变基因的待测基因组进行多重PCR扩增。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述多重PCR反应的反应程序为：98℃变性30秒；98℃保持5秒，62℃保持30秒，72℃保持30秒，15个循环；最终72℃延伸5分。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，还包括将多重PCR扩增获得的产物进行测序的步骤。优选的，选择Illumina高通量测序平台测序。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在测序步骤中的PCR扩增程序为：98℃变性30秒；98℃保持5秒钟,68℃保持120秒，15个循环；72℃延伸5分钟。

10.权利要求1-2任一项所述的野生型特异性阻止探针、权利要求3-4任一项所述的基于抑制野生型的多重PCR扩增反应体系和/或权利要求5所述的基于抑制野生型的多重PCR反应试剂盒在用于检测突变基因产品的用途。优选的，所述的用途为在制备用于检测肿瘤驱动突变基因的用途。