[发明专利]一种贵州獐牙菜中獐牙菜苦苷的制备方法

说明书

本发明属于中药技术领域，公开了一种贵州獐牙菜中獐牙菜苦苷的制备方法包括：大孔吸附树脂分离，取贵州獐牙菜提取物过滤，吸附于D101大孔树脂柱，吸附8小时后分别用纯水和10％乙醇/水洗脱；硅胶柱色谱纯化，硅胶G为柱填料，以二氯甲烷:乙醇＝9:1，V/V或乙酸乙酯:乙醇＝9:1，V/V为洗脱剂；重结晶精制，取獐牙菜苦苷纯品加入15倍量无水乙醇加热溶解过滤，放置到冰箱中冷置过夜析出白色固体，过滤，少量无水乙醇洗涤，冷冻干燥后纯度达到97％，色泽浅白，无色素残留乙醇提取、大孔吸附树脂分离、硅胶柱色谱纯化、重结晶精制。本发明操作步骤简单、分离效率高、制备量大的獐牙菜苦苷制备方法。

技术领域

本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种贵州獐牙菜中獐牙菜苦苷的制备方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：獐牙菜属(Swertia)植物为龙胆科(Gentianaceae)双子叶植物纲菊亚纲，一年生或多年生草本。全世界獐牙菜属植物约有170种，主要分布在亚洲，少数分布在北美洲和非洲，仅一种分布于欧洲。我国约有79种和10个变种，分布于全国26个省(区)。獐牙菜属植物在我国西南部和喜马拉雅地区的分布占全国分布的90％以上，其中云南、贵州、四川和西藏四省区的分布占全国分布的80％以上。贵州獐牙菜(Swertia kouitchensis)又名四棱獐牙菜，为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属植物，一年生草本，产于贵州的盘县、水城、威宁、湄潭、遵义、江口、印江、凯里、贵阳等县、市。在贵州地区主要用于治小儿高烧、口苦渐热、湿热黄疸、咽喉肿痛及蛇咬伤。由于本属植物药理作用显著，对其研究与开发也越来越受重视。迄今为止，约有50余种獐牙菜属植物的化学成分研究有文献报道。从该属植物中已分离得到270多个化合物。结构类型主要为裂环烯醚萜类、口山酮类、黄酮类以及三萜类等。环烯醚萜类化合物是龙胆科植物的主要药效成分之一，也是本科植物的特征性成分，在化学分类学上具有重要意义。贵州獐牙菜中环烯醚萜类化合物主要为獐牙菜苦苷(Swertiamarin)。该化合物具有保肝、利胆、抗炎及解痉止痛等作用。近年来，世界各国积极推进该类化合物的开发，并广泛应用于医药保健、日用化工和食品加工等领域。研究獐牙菜苦苷的提取分离纯化方法和生产工艺具有重要的现实意义。

目前对獐牙菜苦苷原药材的提取分离一般用溶剂粗提、脱酯、萃取后浓缩得粗提物，再经反复色谱柱层析分离及TLC检测。洗脱剂一般为氯仿-甲醇或氯仿-甲醇-水以适当比例混合的溶液。显色剂一般为20％硫酸水溶液，或对二甲氨基苯甲醛。獐牙菜苦苷的精制纯化方法主要有大孔树脂色谱法，硅胶柱色谱法，反相色谱法，凝胶柱色谱法，半制备高效液相色谱法、高速逆流色谱法和纳滤膜分离等。但是，凝胶和反相柱色谱分离法材料昂贵、制备量小等问题无法工业化生产；半制备型高效液相色谱法的仪器和色谱柱价格高昂，设备精细，操作复杂，且制备量少；高速逆流色谱法在分离多组分混合物时如何确定洗脱溶剂种类与配比，保持柱效率长期稳定及扩大生产能力等方面在理论与实践上均有待完善，研究仅限于实验室少量标准样品的试制，离工业化规模生产还有相当大的距离。纳滤膜分离法在植物化学成分制备方面应用尚不广泛，是一种正处于工业开发阶段的化学分离工程技术，目前的报道还多见于实验室研究。现有采用大孔树脂、硅胶和重结晶等方法的工艺过程较多，导致工业化成本增加。同时，由于獐牙菜属各种植物中化学成分具有一定差异，其中獐牙菜苦苷的制备方法各有差异，目前还没有针对贵州獐牙菜中獐牙菜苦苷的制备方法。贵州獐牙菜在贵州省的分布较多，蕴藏量丰富，由于贵州省特有的气候条件，使得其中的獐牙菜苦苷含量较大，是制备獐牙菜苦苷的较好的植物来源。