[发明专利]一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法

权利要求书

1.一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、酵母菌增殖培养：

S01、将酵母菌种在无菌条件下用接种环接种于琼脂斜面培养基上，于28-30℃下培养24小时；

S02、在无菌条件下用接种环将琼脂斜面培养基上的酵母菌接种于平板培养基上扩大培养；

S03、在无菌条件下，将平板培养基上生长24小时的酵母菌菌种接种到装有种子培养基的三角瓶中，并在旋转摇床上摇瓶培养24小时；

步骤2、动物粪便处理：

T01、取动物粪便加5-10倍重量去离子水搅拌混合均匀形成悬浊液；

T02、向悬浊液中添加葡萄糖、酵母浸膏并于121℃、进行高压灭菌，将所得悬浊液放置于恒温箱中37℃条件下培养24-48小时；

T03、证明悬浊液中无菌后、取样测量悬浊液中的镉离子含量，并加无菌水稀释或低温浓缩至悬浊液中镉离子含量为0.1mmol/L-1mmol/L；

T04、向悬浊液中添加PH调节剂调节PH至4.5-5.5；

步骤3、动物粪便镉富集：

M01、向悬浊液中接种1-5％重量的种子培养基中的酵母菌；

M02、将接种有酵母菌的悬浊液装入三角瓶中，在旋转摇床上摇瓶培养120-160小时后收获菌液，将菌液过滤后再进行离心弃上清液，然后用去离子水清洗再离心，重复操作3-5次收获菌体，在60-70℃条件下将菌体烘干即得富集有镉离子的酵母菌菌体。

2.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述琼脂斜面培养基以重量组分计包括去离子水800-1200份、葡萄糖15-25份、蛋白胨15-25份、酵母浸膏8-12份、琼脂粉15-25份；

所述琼脂斜面培养基的制备方法包括：将葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏和琼脂粉搅拌加热溶于温度为45-55℃的去离子水中，待完全溶解后转入试管中，每管装量为1/4-1/3；加塞后经121℃，30分钟高灭菌；在培养基未凝固前呈15-25°倾斜放置；凝固后经恒温37℃培养24小时且经鉴定无菌后置于4℃的冰箱中贮藏备用。

3.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述平板培养基以重量组分计包括去离子水800-1200份、葡萄糖20-40份、蛋白胨20-40份、酵母浸膏15-25份、琼脂粉60-80份；

所述平板培养基的制备方法包括：将葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏和琼脂粉搅拌加热溶于温度为45-55℃的去离子水中，待完全溶解后转入试管中，每管装量为1/4-1/3；加塞后经121℃，30分钟高灭菌；在无菌条件下将试管中未凝固的培养基倒入灭菌的平皿中；凝固后经恒温37℃培养24小时且经鉴定无菌后并颠倒置于4℃的冰箱中贮藏备用。

4.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述种子培养基以重量组分计包括去离子水800-1200份、葡萄糖15-25份、蛋白胨15-25份、酵母浸膏8-12份；

所述种子培养基的的制备方法包括：将葡萄糖、蛋白胨和酵母浸膏搅拌溶于去离子水中；并装入三角瓶中，于121℃，30分钟高灭菌；灭菌后放置于恒温箱中37℃培养24-48小时，经鉴定无菌后贮藏备用。

5.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述S03中的摇瓶培养的转速设定为150-200rpm/min；环境温度设定为27-29℃。

6.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述M02中的摇瓶培养的转速设定为220-250rpm/min；环境温度设定为27-29℃。

7.根据权利要求1所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述PH调节剂采用氢氧化钠、氢氧化钙、盐酸、醋酸、碳酸钠或碳酸氢钠中的一种。

8.根据权利要求7所述的一种悬浮酵母菌富集动物粪便中镉的方法，其特征在于，所述PH调节剂在使用时先用去离子水搅拌溶解配置成浓度为0.05-0.2mol/L的PH调节液。