[发明专利]一种珠蛋白的制备方法有效
| 申请号: | 201811012773.6 | 申请日: | 2018-08-31 |
| 公开(公告)号: | CN108998492B | 公开(公告)日: | 2022-07-19 |
| 发明(设计)人: | 秦晓娟;宫亚峰 | 申请(专利权)人: | 南京钦润生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C07K14/805 |
| 代理公司: | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人: | 尹均利 |
| 地址: | 211100 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 珠蛋白 制备 方法 | ||
1.一种珠蛋白的制备方法,具体步骤如下:
(1)从新鲜动物血液中离心获得血细胞,使其充分溶血后,加入中性蛋白酶酶解去除血红素铁,再经羧甲基淀粉脱色,得到珠蛋白肽溶液;
(2)将珠蛋白肽溶液加入到NaCl的离子溶液中,进行高静压处理后,再进行高压脉冲电场处理,冷冻干燥获得珠蛋白粉;
高静压处理的方法是:将脱色得到的珠蛋白肽溶液加入到0.2mol/LNaCl的离子溶液中,配成蛋白溶液质量浓度为1%-5%的珠蛋白脱色液后,加入真空密封的聚乙烯塑料袋中,放于压力容器内腔,并浸没于传压介质中,进行高静压处理,设定压力水平为300-600MPa,常温保压10-30min。
2.根据权利要求1所述一种珠蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中获得血细胞的具体步骤是:使用新鲜的猪血,加入抗凝剂处理后,3500r/min离心10min,从而分离得到血细胞。
3.根据权利要求1所述一种珠蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中对血细胞的溶血方法是:在血细胞中,加入血细胞三倍体积的蒸馏水充分混合,并用磁力搅拌器搅拌30min使血细胞充分溶血。
4.根据权利要求1所述一种珠蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中的中性蛋白酶酶解过程是:血细胞充分溶血后,调节溶血液温度至55℃,pH为7.5,加入中性蛋白酶,酶量为5000U/g,酶解时间为4h,酶解完全后灭酶活。
5.根据权利要求1所述一种珠蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中羧甲基淀粉脱色方法为:将酶解后的酶解溶液,4000r/min离心15min取上清液,加入羧甲基淀粉使其终浓度为0.2%,在pH为4.0、50℃的条件下脱色吸附20min,得到珠蛋白肽溶液。
6.根据权利要求1所述一种珠蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,高压脉冲电场处理的具体方法是:高静压处理后的珠蛋白脱色液进行脉冲电场处理,脉冲宽度2μs;
脉冲频率100Hz;水浴温度为5℃,处理腔最高温度小于15℃,脉冲电场处理条件;电场强度为25-35kV/cm;处理时间100-600μs。
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