[发明专利]用于控制小麦叶片衰老的引物、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于控制小麦叶片衰老的引物、试剂盒及其应用，属于植物基因工程和小麦分子育种技术领域，能够解决在延缓许多作物衰老突变体中，作物农艺性状较差，很难被利用的问题。该技术方案包括根据小麦基因TaNACS设计特异性上下游引物，利用过量表达TaNACS基因促进小麦叶片的衰老，利用RNAi技术使TaNACS基因在小麦中沉默而延缓小麦叶片的衰老。本发明应用小麦TaNACS基因可以控制小麦叶片衰老过程，同时该基因的过表达或者基因沉默材料均不影响小麦其它农艺性状。

技术领域

本发明属于植物基因工程和小麦分子育种技术领域，尤其涉及一种用于控制小麦叶片衰老的引物、试剂盒及其应用。

背景技术

衰老是植物发育的最后一个阶段，其不仅受温度、病害、胁迫等外因影响，同时还被基因调控，受体内激素水平的影响。叶片衰老与作物产量及品质息息相关，作物早衰或晚衰不利于完成其正常的生命周期，造成作物减产或者品质降低，严重影响农艺性状。因此，叶片衰老调控因子的发现及其应用是实现作物高产高品质的有效途径之一。

小麦是世界上重要的粮食作物之一，提高小麦产量是诸多育种家的目标。叶片早衰会缩短有效光合作用时间，使小麦减产；适时晚衰则可以有效提高小麦产量；但过度晚衰又会使小麦生育周期延长，不利于农业生产耕作。因此，小麦的衰老时间的调控是产量与品质提高的重要控制因素。虽然，在许多作物中均有延缓衰老突变体被研究，但多数农艺性状较差，很难被利用。因此，获得特异调控小麦衰老但不影响其它农艺性状的基因是解决延缓衰老提高小麦产量的关键策略之一。

发明内容

针对现有技术存在的不足之处，本发明提出用于控制小麦叶片衰老的的引物、试剂盒及其应用，其能够特异调控小麦衰老，同时不影响其它农艺性。

为解决所述技术问题，本发明采用的技术方案为：

根据小麦基因TaNACS设计特异性上下游引物，具体包括：

本发明还提出一种试剂盒，包含如上述技术方案所述的用于控制小麦叶片衰老的引物。

本发明还提出一种利用上述技术方案所述的引物控制小麦叶片衰老的方法，具体的，利用过量表达TaNACS基因促进小麦叶片的衰老，利用RNAi技术使TaNACS基因在小麦中沉默而延缓小麦叶片的衰老。

作为优选，所述利用过量表达TaNACS基因促进小麦叶片的衰老，具体包括：

将以小麦cDNA为模板，以SEQ ID NO.1为上游引物、SEQ ID NO.2为下游引物特异扩增得到的TaNACS基因产物通过重组连接到过表达载体上，形成TaNACS重组载体；

将所述TaNACS重组载体整合进入小麦基因组，筛选获得阳性转基因材料。

作为优选，所述利用RNAi技术使TaNACS基因在小麦中沉默而延缓小麦叶片的衰老，具体包括：

将利用巢式PCR得到的RNAi片段连接到载体上，得到TaNACS基因RNAi最终载体；

将所述RNAi最终载体整合进入小麦基因组，筛选获得阳性转基因材料。

作为优选，所述利用巢式PCR得到RNAi片段，具体包括：

以TaNACS cDAN序列为模板，以SEQ ID NO.3为上游引物、SEQ ID NO.4为下游引物进行PCR扩增，获得初步的RNAi片段；

将上述初步的RNAi片段稀释50倍，以稀释后的初步的RNAi片段为模板，以SEQ IDNO.5为上游引物、SEQ ID NO.6为下游引物进行第二轮PCR扩增，得到RNAi片段。