[发明专利]用于控制小麦叶片衰老的引物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.用于控制小麦叶片衰老的引物，其特征在于，根据小麦基因TaNACS设计特异性上下游引物，具体包括：

。

2.试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1所述的用于控制小麦叶片衰老的引物。

3.利用权利要求1所述的引物控制小麦叶片衰老的方法，其特征在于，包括利用过量表达TaNACS基因促进小麦叶片的衰老，以及利用RNAi技术使TaNACS基因在小麦中沉默而延缓小麦叶片的衰老；

其中，所述利用过量表达TaNACS基因促进小麦叶片的衰老，具体包括：

将以中国春小麦cDNA为模板，以SEQ ID NO.1为上游引物、SEQ ID NO.2为下游引物特异扩增得到的TaNACS基因产物通过重组连接到过表达载体上，形成TaNACS重组载体；

将所述TaNACS重组载体整合进入小麦基因组，筛选获得阳性转基因材料；

所述利用RNAi技术使TaNACS基因在小麦中沉默而延缓小麦叶片的衰老，具体包括：

以TaNACS cDNA序列为模板，以SEQ ID NO.3为上游引物、SEQ ID NO.4为下游引物进行PCR扩增，获得初步的RNAi片段；

将上述初步的RNAi片段稀释50倍，以稀释后的初步的RNAi片段为模板，以SEQ ID NO.5为上游引物、SEQ ID NO.6为下游引物进行第二轮PCR扩增，得到RNAi片段，进而将所述RNAi片段连接到载体上，得到TaNACS基因RNAi最终载体；

将所述RNAi最终载体整合进入小麦基因组，筛选获得阳性转基因材料。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括鉴定阳性转基因材料的步骤，具体为：

以TaNACS重组载体及TaNACS基因RNAi最终载体转基因材料的cDNA为模板，以SEQ IDNO.7为上游引物、SEQ ID NO.8为下游引物进行荧光定量PCR检测，鉴定阳性转基因材料。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述以小麦cDNA为模板，以SEQ ID NO.1为上游引物、SEQ ID NO.2为下游引物特异扩增得到TaNACS基因产物的扩增程序为：

95℃ 3 min；95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 1 min，33个循环；72℃ 10 min。