[发明专利]一种用于检测人巨细胞病毒的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测人巨细胞病毒的试剂盒，包括用于人巨细胞病毒DNA检测的特异性PCR引物和荧光探针、DNA内标检测的特异性引物和探针、PCR反应缓冲液、酶混合液、DNA内标、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品和定量参考品A、B、C、D；其序列号见SEQ ID No.1~6。本发明的优点在于操作简单快捷，能在20min内完成人巨细胞病毒DNA的定量检测；灵敏度高，最低检出限为34.5IU/ml；特异性好，本发明根据内重复序列µl65设计1对引物，与其他病原体无交叉干扰，具有较高的特异性；本发明试剂盒可溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL，定量结果具有可追溯性，对于人巨细胞病毒核酸相关疾病的临床快速检测具有很高的参考价值，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是涉及一种用于检测人巨细胞病毒的试剂盒。

背景技术

人巨细胞病毒（HCMV）属于疱疹病毒科β亚科，含线状双链DNA分子，长度为220-240kb，在形态、基因结构上与其他疱疹病毒类似。HCMV是世界范围内引发先天性感染最常见的一种病毒，在活产儿中感染率为0.2%-2.0%，是风疹病毒感染的2倍。其感染人群遍布全球，且多数人是在幼年或青年时期获得感染，随着年龄的增长，抗体的阳性率亦增高，男、女性无明显差异，提示HCMV的感染甚为普遍，且常引起多系统疾病，胎儿肝脏受累较常见，除此之外还可以侵犯呼吸、神经、血液系统及致胎儿畸形，严重危及胎儿生命。

临床上，针对HCMV的检测、诊断方法主要有：病毒分离培养、病毒抗原的检测、血清学标志物检测和HCMV DNA检测。其中HCMV 病毒培养的时间太长，不适用于临床应用；病毒抗原检测的标本必须在8 h 内进行处理，并且在病毒拷贝数低的情况下，可能检测不出pp65 抗原；免疫抑制剂的使用和“窗口期”的问题使血清学检测缺乏敏感性。采用实时荧光PCR 技术检测HCMV DNA，具有灵敏度高、特异性好和操作简便等优势，虽然目前已有公司将PCR技术应用于HCMV DNA检测，但各厂家定量单位均未溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL，且灵敏度较低（400 Copies/mL），导致出现临床病患漏检，而且各厂家定量结果无可比性、无溯源性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可溯源至世界卫生组织（WHO）标准单位IU/mL且操作简单，灵敏度高，特异性好，检测结果快速的用于检测人巨细胞病毒的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于检测人巨细胞病毒的试剂盒，包括用于人巨细胞病毒DNA检测的特异性PCR引物和荧光探针、DNA内标检测的特异性引物和探针、PCR反应缓冲液、酶混合液、DNA内标、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品和定量参考品A、B、C、D；其中

所述用于人巨细胞病毒DNA检测的特异性PCR引物包括引物1和引物2，所述引物1和引物2的序列为：

引物1：5’- AACTGCCTCACCCACCTGC -3’（SEQ ID No.1），

引物2：5’- AACGATGGAGGACGACCAACAC -3’（SEQ ID No.2）；

所述用于DNA内标检测的特异性引物包括引物3和引物4，所述引物3和引物4的序列为：

引物3：5’- GAAGGCTCATGGCAAGAAAG -3’（SEQ ID No.3），

引物4：5’- CTCACTCAGTGTGGCAAAGG -3’（SEQ ID No.4）；

所述用于人巨细胞病毒DNA检测的探针为探针1，其序列为：

探针1：FAM- AAACACCATCTTTCCGGAGGTGCGGT –BHQ1（SEQ ID No.5），