[发明专利]一种筛选高效固氮溶磷菌的方法

权利要求书

1.一种筛选高效固氮溶磷菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)首先将土壤与水混合后震荡培养，离心后弃去上清液；

(b)按比例向沉淀中加入含外加碳源溶磷培养基,进行培养；

(c)将步骤(b)所得培养液离心后弃去上清液，按比例加入不含外加碳源固氮培养基，进行培养；

(d)将步骤(c)所得培养液离心后弃去上清液，按比例加入不含外加碳源溶磷培养基，进行培养；

(e)按照步骤(c)和(d)的方法交替进行培养多次；

(f)采用溶磷固氮培养基筛选出目标菌株；

所述步骤(a)中按照1：10的体积比将土壤与水混合，在30℃恒温振荡培养24h，离心后弃去上清液；所述步骤(b)中按照沉淀＝1：10的体积比向沉淀中加入含外加碳源溶磷培养基，在30℃恒温培养24h；

所述步骤(c)中按照沉淀＝1：10的体积比向沉淀中加入不含外加碳源固氮培养基，在30℃恒温培养24h；

所述步骤(d)中按照沉淀＝1：10的体积比向沉淀中加入不含外加碳源溶磷培养基，在30℃恒温培养24h；

所述步骤(e)中按照步骤(c)和(d)的方法交替进行培养各5-7次；

所述含外加碳源溶磷培养基成分包括：10g/L葡萄糖，5g/L CaPO₄，0.1g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L KCl，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/L MgCl₂·6H₂O，1mL/L微量元素一溶液，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min；

所述不含外加碳源溶磷培养基成分包括：5g/L CaPO₄，0.1g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L KCl，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/L MgCl₂·6H₂O，1mL/L微量元素一溶液，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min；

所述不含外加碳源固氮培养基成分包括：1g/L K₂HPO₄，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，0.1g/LCaCl₂·2H₂O，1mL/L微量元素二溶液，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min；

所述溶磷固氮培养基成分包括：10g/L葡萄糖，5g/L CaPO₄，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/LMgCl₂·6H₂O，0.2g/L CaSO₄·2H₂O，1mL/L微量元素二溶液，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min；

所述微量元素一溶液成分包括1g/L FeCl₃·6H₂O，0.1g/L H₃BO₃，0.02g/L CuSO₄·5H₂O，0.2g/L KI，0.1g/L MnCl₂·4H₂O，0.1g/LZnSO₄·7H₂O，0.1g/L CoCl₂·6H₂O，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min；

所述微量元素二溶液成分包括5g/L NaMoO₄·2H₂O，5g/L FeSO₄·7H₂O，0.1g/L H₃BO₃，0.02g/L CuSO₄·5H₂O，0.2g/L KI，0.1g/L MnCl₂·4H₂O，0.1g/LZnSO₄·7H₂O，0.1g/LCoCl₂·6H₂O，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min。