[发明专利]羊肚菌液体菌种的制备方法

说明书

本发明属于羊肚菌人工栽培技术领域，具体涉及一种羊肚菌液体菌种的制备方法。针对现有方法制备的羊肚菌液体菌种菌丝体生长活力低，菌丝体直径大、堵塞设备等问题，本发明提供一种羊肚菌液体菌种的制备方法，包括以下步骤：a、将羊肚菌母种接种于PDA固体培养基中，于22～25℃下恒温培养5～10天；b、取固体培养基，接种于装有液体培养基的四棱大挡板摇瓶中，在摇床上培养2～4天；c、在液体菌种发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种摇瓶羊肚菌液体菌种，无菌条件下，24～28℃下培养1～3天，即得到羊肚菌液体菌种。本发明液体菌种制备方法耗时短，生产周期短、菌龄一致、重复性好、菌丝球直径小，呈絮状，菌体活力大，适宜工厂化应用。

技术领域

本发明属于羊肚菌人工栽培技术领域，具体涉及一种羊肚菌液体菌种的制备方法。

背景技术

羊肚菌(Morchella deliciosa Fr.)是一种珍稀的食药用菌，不同品种的羊肚菌均含有7种人体必需氨基酸，氨基酸总量近40％，脂肪含量低于1％，同时含有丰富的纤维素、矿质元素等，属于优质蛋白食品。四百多年前《本草纲目》已记载其“味甘寒，性平，无毒，益肠胃，化痰理气”。现代医学还发现，羊肚菌能够提升机体免疫力、对肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞都具有一定的杀伤能力，并且能够抗疲劳、降血脂、减轻放化疗引起的毒副作用。然而，野生羊肚菌产量很低，现在还缺乏成熟的人工栽培技术，市场供不应求，羊肚菌价格高昂。

在羊肚菌人工栽培过程中，原种的制备耗时长，成本高，运输保藏条件苛刻，且制作运输保藏过程均容易染菌，全程依赖人工操作不仅费时费力，并且容易导致菌种质量参差不齐，严重阻碍羊肚菌的规模化栽培。近年来兴起的液体菌种制备有利于大规模工厂化栽培的推进，但现行的液体菌种质量评价体系单一，大多以菌丝体生物量作为优劣指标，而忽略菌丝体生长活力。

专利CN105441342A公开了一种羊肚菌液体菌种的生产工艺，采用特有配方和组分配制液体菌种，并调节液体菌种的pH值为6.5～6.8，该pH值非常适宜羊肚菌生长繁殖，能够缩短羊肚菌的周期，增强菌种活力；并且，该方法采用高压脉冲电场进行杀菌，去除杂菌能力强。该专利虽可行，但其生产成本高，不适宜工业化运用。

菌丝体结球后质地紧实，球越大生物量越大，但羊肚菌菌丝体生长过程需要丰富的营养及充足的氧气供应，结球过大的菌丝体，尤其是菌丝球内的菌丝体汲取的营养不足，导致接种后的菌丝球生长滞后；汲取的氧气不足，导致无氧呼吸，产生乙醇等副产物加速菌丝体衰败自溶。另一方面大体积的菌丝球容易堵塞工厂化制种接种设备，无法实施喷洒、注射等接种方式。

发明内容

本发明要解决的技术问题为：现有方法制备的羊肚菌液体菌种菌丝体生长活力低，菌丝体直径大、堵塞设备等问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供一种羊肚菌液体菌种的制备方法，包括以下步骤：

a、将羊肚菌母种接种于PDA固体培养基中，于22～25℃下恒温培养5～10天；

b、取步骤a所得固体培养基，接种于装有液体培养基的四棱大挡板摇瓶中，在摇床上培养2～4天，得到摇瓶羊肚菌液体菌种；

c、在液体菌种发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种步骤b得到的摇瓶羊肚菌液体菌种，无菌条件下，24～28℃下培养1～3天，即得到羊肚菌液体菌种；

所述液体培养基组成为：按重量百分比计，麸皮4％～7％，玉米淀粉1％～3％，酵母粉0.1％～0.4％，葡萄糖1％～3％，蛋白胨0.2％～0.4％，MgSO₄ 0.05％～0.15％，KH₂PO₄0.1％～0.15％，余量为水。