[发明专利]羊肚菌液体菌种的制备方法

权利要求书

1.羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将羊肚菌母种接种于PDA固体培养基中，于22～25℃下恒温培养5～10天；

b、取步骤a所得固体培养基，接种于装有液体培养基的四棱大挡板摇瓶中，在摇床上培养2～4天，得到摇瓶羊肚菌液体菌种；

c、在液体菌种发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种步骤b得到的摇瓶羊肚菌液体菌种，无菌条件下，24～28℃下培养1～3天，即得到羊肚菌液体菌种；

所述液体培养基组成为：按重量百分比计，麸皮4%～7%，玉米淀粉1%～3%，酵母粉0.1%～0.4%，葡萄糖1%～3%，蛋白胨0.2%～0.4%，MgSO₄ 0.05%～0.15%，KH₂PO₄ 0.1%～0.15%，余量为水；

所述液体培养基的制备方法包括以下步骤：将4%～7%的麸皮加配方量的水煮沸20～30min，过滤，在滤液中加入经超微粉碎的玉米淀粉1%～3%，酵母粉0.1%～0.4%，葡萄糖1%～3%，蛋白胨0.2%～0.4%，MgSO₄ 0.05%～0.15%，KH₂PO₄ 0.1%～0.15%，搅拌均匀后在压力0.1～0.2MPa，121℃，灭菌20～40min；

所述超微粉碎后的各原料全部粒径在50～70μm范围内；

步骤b所述接种量为：每100ml液体培养基中接种3～5个直径3～7mm的固体培养基，所述接种时将固体培养基分切为小于1mm×1mm的小块；

步骤b所述四棱大挡板摇瓶底部四棱凸起呈四叶草状平均分布，每条棱长3.4～3.8cm，棱高1.6～2.0cm。

2.根据权利要求1所述的羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于：步骤a所述的接种量为：每90×15mmPDA培养基中接种3～7mm×3～7mm母种。

3.根据权利要求1或2所述的羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于：步骤a所述的PDA固体培养基的组成包括：按重量份数计，土豆150～250份，葡萄糖20～30份，琼脂15～20份，水1000份。

4.根据权利要求1或2所述的羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于：步骤b所述摇床震荡速度为150～200rpm，温度为24～28℃。

5.根据权利要求1或2所述的羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于：步骤c所述接种量为培养基体积的5～10%。

6.根据权利要求1或2所述的羊肚菌液体菌种的制备方法，其特征在于：步骤c所述羊肚菌液体菌种发酵罐培养的条件为：转速150～350rpm，溶氧量50～90%。