[发明专利]一种牙髓间充质干细胞的制备、培养及纯化方法在审
| 申请号： | 201810960859.5 | 申请日： | 2018-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN108949682A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 朱建斌;江嘉豪;何美弟;陈炽峰;康斯敏;陈碧莹;李静静;蔡祥胜;王明珠;王进辉 | 申请（专利权）人： | 广东唯泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 刘婉;许英伟 |
| 地址： | 528200 广东省佛山市南海*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 间充质干细胞 牙髓 制备 消化液 沉淀 分离和纯化 消化 离心去除 牙髓组织 上清液 滤除 稀释 牙齿 清洗 | ||
1.一种牙髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)向牙髓组织加入组织消化液进行消化；
(2)消化结束后再加入H-DMEM培养液稀释消化液，滤除牙齿碎片，滤液离心去除上清液，得到沉淀；
(3)用H-DMEM培养液清洗所述沉淀，再次离心去上清，得到分离后的牙髓间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织消化液包括H-DMEM、基于所述H-DMEM体积2mg/ml的中性蛋白酶、1mg/ml的I型胶原酶和0.5mg/ml的DNA酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述牙髓组织来源于儿童换牙过程中自然脱落的乳牙。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，将所述乳牙用酒精消毒后，用组织清洗液清洗，压碎后剔除破碎的牙齿碎片，获得牙髓组织。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述组织清洗液包括生理盐水，以及按生理盐水体积计25μg/ml的硫酸庆大霉素和5μg/ml的两性霉素B。
6.一种牙髓间充质干细胞的培养及纯化方法，其特征在于，在通过如权利要求1至5任一项所述的方法得到所述牙髓间充质干细胞后，使用选择培养基进行细胞培养。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述选择培养基包括无血清培养基、以及基于所述无血清培养基体积15ng/ml的FGF-4、10ng/ml的HGF、终浓度为0.3mM的α-酮戊二酸。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞培养的氧气体积浓度为10％。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞培养的气体条件为：氧气体积浓度10％、二氧化碳体积浓度5％、氮气体积浓度85％。
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