[发明专利]一种用于抗体药物偶联物的中间体的制备方法

说明书

本发明提供一种用于抗体药物偶联物的中间体的制备方法。该制备方法步骤较少，容易操作，质量控制难度较小，化学合成工艺较为稳定，更适合进一步工业化生产。

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种用于抗体药物偶联物的中间体(药物-连接子)的制备方法。

背景技术

抗体药物偶联物(Antibody drug conjugate，简称ADC)是一类新型的抗肿瘤药物，其原理是将细胞毒素连接在抗体上，通过抗体对癌细胞表面特定抗原的识别，通过内吞作用进入癌细胞，从而将细胞毒素运输到靶点，达到靶向性治疗恶性肿瘤的目的。ADC与传统的小分子抗肿瘤药物相比，因能借助抗体的靶向识别性与毒素的高活性，故更具备特异性和有效性。ADC包括三个不同的组成部分，即抗体、连接子和细胞毒素。抗体实现靶向性，连接子保证在ADC在血液转运过程中的稳定性，而到达作用靶点后，毒素发挥对癌细胞的杀伤作用。根据作用机制的不同，适用于ADC的毒素分为微管类抑制剂(Microtubuleinhibitors)，DNA损伤剂(DNA damaging agents)，RNA聚合酶抑制剂(RNA polymeraseinhibitors)等。目前，市场上销售和临床试验中的ADC所采用的毒素主要为微管类抑制剂，主要包括基于海兔毒素(Dolastatin-based)设计的化合物，比如MMAE、MMAF和MMAD，以及基于美登素(Maytansine-based)设计的化合物，比如DM1和DM4。连接子方面，主要应用的为不可裂解型，如缬氨酸-瓜氨酸(Valine-Citriline)和环己基甲酸(MCC)，经过溶酶体水解后，药物仍然具有活性，并通过连接区与某个氨基酸残基结合在一起。

抗体药物偶联物的形成方式有多种。既可以通过抗体上的氨基或巯基和药物连接子进行化学反应偶联，也可以对抗体进行修饰，在抗体上引入特定功能基后，再和药物连接子进行化学反应偶联或酶催化反应偶联。美国Ambrx公司在递交的美国专利申请US2016/0052966A1中，提供了一种新型的，通过羟胺和抗体偶联的药物中间体(药物-连接子，化合物结构通式I,见图1)。

其中一个重要的系列是如下式所示的化合物A或其盐,保留了MMAF中碱性的三级胺。Ambrx公司在WO2013185117中披露了应用这些毒素-连接子组合物形成前列腺特异性膜抗原抗体药物偶联物，也在WO2013192360中披露了应用这些毒素-连接子组合物形成抗CD-70抗体药物偶联物。

这类化合物的合成关键是如上所示化合物A中连接子和药物之间的C-N键的形成。从有机合成路线设计方式来讲，C-N键的形成主要有取代反应和还原胺化两种选择。根据羟胺部分连接子的不同结构，Ambrx公司在专利申请中披露分别通过还原胺化反应(图2，合成化合物A)和在一级胺上进行取代反应后，再通过还原胺化引入甲基(图3，合成化合物B)合成这类通式为化合物结构通式I的合成方法。

化合物结构通式I中，N终端缬氨酸的N上带有一个甲基，位阻较大，在这种情况下，还原胺化形成C-N键往往是合成设计的第一选择。

如图2所示化合物A的合成路线的最后两步，第一步用一甲基澳瑞他汀F(MMAF，化合物2-2)的盐酸盐与带醛基的化合物2-1发生还原氨化反应，得到化合物2-3；第二步用肼脱去邻苯二甲酰基释放出羟胺基团，也就是化合物A。

该反应路线在放大应用生产时表现出一定的缺陷，比如：(1)带乙二醇基团的醛基化合物(即图2中带醛基的化合物2-1)化学上十分不稳定，造成该化合物本身不容易纯化和存放，对放大生产带来很多困扰；(2)第二步用肼脱除邻苯二甲酰胺，反应时间长，杂质多，给反应的后处理和纯化造成困难。

如图3所示化合物B的合成路线的战略是先将氨基酸(缬氨酸脂，3-1)的一级胺直接烷基化，再通过保护胺基，引入带保护的羥胺后，脱保护得到3-4，再和4肽(3-5)缩合得到3-6，然后脱N上的保护基，通过还原胺化再在N上引入甲基。用肼脱去邻苯二甲酰基释放出羟胺基团，得到目标产品化合物B。