[发明专利]表达错义突变的FLNB基因的细胞模型、构建方法与应用

权利要求书

1.一种表达突变的FLNB基因的细胞模型，其特征在于，所述表达突变的FLNB基因所用的细胞为ATDC5细胞。

2.如权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述突变的FLNB基因包括含有突变位点c.4756G>A的FLNB基因、含有突变位点c.512T>G的FLNB基因、导致骨发育不良的突变基因、导致骨化中心提前融合的骨骼畸形疾病的突变基因或导致先天性脊柱侧凸的突变基因。

3.如权利要求1或2所述的细胞模型，其特征在于，所述FLNB基因不同位点的突变，通过其对细胞形态、凋亡、迁移及下游的信号传导通路等作用之间的相互制衡，可导致所述ATDC5细胞产生不同的的骨骼系统畸形的表型。

4.权利要求1至3中任一所述细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)FLNB全长cDNA基因的5’端组装标记基因后进行扩增；

(2)将步骤(1)中获得的基因进行位点c.4756G>A或位点c.512T>G的定点突变；

(3)将步骤(2)中获得的突变基因与载体相连构建表达载体；

(4)将步骤(3)获得的表达载体通过转染导入ATDC5细胞，经过筛选鉴定得到稳定表达错义突变的FLNB基因的细胞模型。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述标记基因为增强绿色荧光蛋白基因。

6.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述定点突变采用PCR诱导定点突变。

7.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述PCR诱导定点突变所使用引物如下：

FLNB-G4756A-F:ACAAGACTaGGCGCTATATGATTGGAGTCACC

FLNB-G4756A-R:ATAGCGCCtAGTCTTGTCGGGGATGTAGGTGA

FLNB-T512G-F:AAGACGGCAAAGCCCgGGGAGCCCTGGTAGACAGCT

FLNB-T512G-R:CCGGGCTTTGCCGTCTTGCCAGTTCTGGTTAA。

8.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述载体为pCR3.1(-)载体。

9.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(4)中所述转染使用jet PRIME转染试剂。

10.权利要求1所述的细胞模型的以下任一应用：

(1)在作为Larsen综合征细胞模型上的应用；

(2)在作为回飞镖样骨发育不全症细胞模型上的应用。