[发明专利]桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种桑蚕蛹抗癌活性肽BPP‑2及其制备方法与应用。将鲜茧缫丝后的桑蚕蛹处理获得桑蚕蛹粉，取桑蚕蛹粉脱脂后，先后在碱性和酸性条件下处理，再透析袋透析，获得桑蚕蛹蛋白。取桑蚕蛹蛋白用alcalase碱性蛋白酶酶解，酶解液进行超滤分离，取分子质量5‑10kDa超滤液，过滤膜后上Sephadex G‑50凝胶，用超纯水进行洗脱，收集第2个洗脱峰对应的洗脱液，冷冻真空干燥后得到所述产物BPP‑2。本发明制备产物纯度均一，对人胃癌细胞SGC‑7901的生长具有抑制作用，对正常细胞人胚胎肾细胞HEK293和小鼠巨噬细胞RAW264.7生长均无不良影响，可用于抗癌产品开发。

技术领域

本发明涉及活性肽制备领域，尤其是涉及了一种桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2及其制备方法与应用。

背景技术

天然活性肽不仅具有促进机体的生长发育与新陈代谢、抗癌、抗氧化、提高免疫功能等重要作用，而且还拥有易被机体消化吸收与毒副作用小等特性。为此，从天然蛋白质中提取活性肽并应用到保健食品、医疗药品等领域中，是深受国内外研究者高度关注的研究热点。

桑蚕蛹是桑蚕(Bombyx mori)的蛹，在我国已有1400多年的食用与药用历史，是被卫生部列入“作为普通食品管理的食品资源名单”中的唯一昆虫类食品。桑蚕蛹富含蛋白质，其蛋白质含量占到蚕蛹干重的45-50％，并且多为优质蛋白。我国是世界上最大的蚕丝生产国，年产鲜茧约65万吨，缫丝后可产蚕蛹约30万吨，桑蚕蛹资源非常丰富。但当前极大部分桑蚕蛹直接作为畜禽饲料和营养添加剂，有些还被当作肥料或直接废弃，造成资源浪费。分离制备桑蚕蛹抗癌活性肽，对于推进桑蚕蛹药用开发以及桑蚕蛹资源高值化利用等具有积极的现实意义。

发明内容

为了解决背景技术中的问题，本发明提供了一种桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2及其制备方法与应用，采用蛋白酶酶解、超滤分离、Sephadex G-50凝胶纯化的方法，制备得到了桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2，桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2是发明人从桑蚕蛹中分离提取的一种新型活性肽并将其命名为BPP-2。

本发明采用的技术方案如下：

一、一种桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2的制备方法：

1)将鲜茧缫丝后的桑蚕蛹处理获得桑蚕蛹粉；

2)桑蚕蛹粉脱脂后依次在碱性和酸性条件下处理获得桑蚕蛹蛋白；

3)桑蚕蛹蛋白用alcalase碱性蛋白酶进行酶解，然后离心处理并收集上清液，上清液冷冻干燥后再溶解于超纯水中得到桑蚕蛹蛋白酶解液；

4)桑蚕蛹蛋白酶解液进行超滤分离，收集分子质量5-10kDa超滤液；

5)超滤液过滤膜后上Sephadex G-50凝胶柱进行分离洗脱，收集第2个洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的桑蚕蛹活性肽组分BPP-2。

所述制备方法的具体工艺条件如下：

步骤1)：鲜茧缫丝后的桑蚕蛹于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，得到桑蚕蛹粉；

步骤2)：取桑蚕蛹粉加入石油醚溶液中，在25℃下重复浸泡脱脂3次，每次脱脂时间为24h，抽滤，滤渣于40℃烘干并过80-100目筛得到滤渣粉，将滤渣粉加入超纯水后进行磁力搅拌充分溶解，用1M NaOH调pH至9.5，搅拌1h，在5000rpm的转速下离心10min后收集上清液，然后用1M HCl调节上清液pH至4，静置30min后在5000rpm的转速下离心10min，收集沉淀，沉淀用超纯水溶解后，用14000Da透析袋透析48h，获得桑蚕蛹蛋白；

步骤3)：桑蚕蛹蛋白用alcalase碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后，迅速置于沸水15min终止酶解反应，冷却至室温，在5000rpm的转速下离心10min后收集上清液，上清液在-50℃下真空干燥后溶解于超纯水中，得到质量体积百分比为0.6％(g/mL)的桑蚕蛹蛋白酶解液；