[发明专利]桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2组分的制备方法，其特征在于：

1)将鲜茧缫丝后的桑蚕蛹处理获得桑蚕蛹粉；

2)桑蚕蛹粉脱脂后依次在碱性和酸性条件下处理获得桑蚕蛹蛋白；

3)桑蚕蛹蛋白用alcalase碱性蛋白酶进行酶解，然后离心处理并收集上清液，上清液冷冻干燥后再溶解于超纯水中得到桑蚕蛹蛋白酶解液；

4)桑蚕蛹蛋白酶解液进行超滤分离，收集分子质量5-10kDa超滤液；

5)超滤液过滤膜后上Sephadex G-50凝胶柱进行分离洗脱，收集第2个洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的桑蚕蛹活性肽组分BPP-2；

所述制备方法的具体工艺条件如下：

步骤1)：鲜茧缫丝后的桑蚕蛹于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，得到桑蚕蛹粉；

步骤2)：取桑蚕蛹粉加入石油醚溶液中，在25℃下重复浸泡脱脂3次，每次脱脂时间为24h，抽滤，滤渣于40℃烘干并过80-100目筛得到滤渣粉，将滤渣粉加入超纯水后进行磁力搅拌充分溶解，用1M NaOH调pH至9.5，搅拌1h后于5000rpm离心10min，收集上清液，然后用1M HCl调节上清液pH至4，静置30min后于5000rpm离心10min，收集沉淀，沉淀用超纯水溶解后，用14000Da透析袋透析48h，获得桑蚕蛹蛋白；

所述步骤2)中桑蚕蛹粉与石油醚溶液的质量体积比为1:3，滤渣粉与超纯水的质量体积比为1:10；

步骤3)：桑蚕蛹蛋白用alcalase碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后，迅速置于沸水15min终止酶解反应，冷却至室温，在5000rpm的转速下离心10min后收集上清液，上清液在-50℃下真空干燥后溶解于超纯水中，得到质量体积百分比为0.6％(g/mL)的桑蚕蛹蛋白酶解液；

所述步骤3)的酶解条件为：桑蚕蛹蛋白的质量浓度为10mg/mL、酶解时间为160～180min、酶解温度为60℃、酶解pH为9.0、加酶量为3500U/g桑蚕蛹蛋白质量；

步骤4)：采用截留分子质量为10kDa的超滤膜对桑蚕蛹蛋白酶解液进行超滤，取透过液，再用截留分子质量为5kDa的超滤膜对透过液进行超滤，取截留液，即得到分子质量5-10kDa的组分，在-50℃下真空干燥后充分溶解于超纯水中配置成质量浓度为3mg/mL的溶液，12000rpm离心10min，取上清超滤液；

步骤5)：将步骤4)所得上清超滤液过0.22μm滤膜，上Sephadex G-50凝胶柱，上样量为1mL，用超纯水进行洗脱，洗脱流速为0.5-0.7mL/min，用自动收集器收集，利用分光光度计在280nm下检测每管吸光度值，绘制洗脱曲线，收集第2个洗脱峰的洗脱液，-50℃下真空冷冻干燥，得到均一的桑蚕蛹活性肽组分，取名为BPP-2。

2.根据权利要求1所述的桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2组分的制备方法，其特征在于，所述步骤4)的超滤条件为：3L桑蚕蛹蛋白酶解液、1.30MPa进膜压力、0.30MPa出膜压力以及25℃工作温度。

3.根据权利要求1-2任一项制备方法得到的桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2组分的应用，其特征在于：所述桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2用于制备抗胃癌药物。

4.根据权利要求3所述的桑蚕蛹抗癌活性肽BPP-2组分的应用，其特征在于：所述抗胃癌药物用于抗击人胃癌细胞SGC-7901。