[发明专利]一种检测葡萄糖转运蛋白1基因分析的方法

说明书

本发明公开了一种检测葡萄糖转运蛋白1基因分析的方法，包括如下步骤：1)分离提取单个细胞；2)由所述单个细胞合成待检测基因的cDNA，所述待检测基因包含葡萄糖转运蛋白1基因；3)PCR预扩增所述待检测基因；4)定量PCR检测所述待检测基因的RNA表达量。5)将待检测基因按不同细胞和/或不同基因分类，比较各待检测基因之间的RNA表达量的变化，获得单个细胞相关基因定量数据。本发明公开了一种检测单个循环肿瘤细胞的单个基因包括葡萄糖转运蛋白1基因，和多个基因RNA表达量的分析方法，作为检测循环肿瘤细胞中单细胞水平的葡萄糖转运蛋白1基因表达的检测和研究之方法。

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，尤其涉及一种检测葡萄糖转运蛋白1基因分析的方法。

背景技术

在分析鉴定不同细胞时，存在细胞的蛋白质和基因表达水平不同甚至不一致的现象，这直接或间接影响到分析细胞的性质和功能的分类。葡萄糖转运蛋白1几乎存在人体的每一个细胞，是上皮细胞葡萄糖转运的主要蛋白质，是细胞代谢水平的一个重要指标，对维持血糖浓度的稳定和大脑供能起到关键作用。葡萄糖是肿瘤细胞能量的主要来源，一般来讲，肿瘤细胞由于处于低氧环境，大多只能对葡萄糖进行无氧代谢，因而对葡萄糖需求更高。然而，当肿瘤细胞进入到血液中后成为循环肿瘤细胞，循环肿瘤细胞周围的氧气环境同肿瘤组织发生变化，检测循环肿瘤中的葡萄糖转运蛋白1(SLC2A1：Solute carrier family2member 1)的表达量可能作为鉴定循环肿瘤细胞的一个有效标志物，同时也可能作为检测癌变的一个重要指标。但是，对于血液中的循环肿瘤细胞，特别是单细胞水平的葡萄糖转运蛋白1基因表达分析，既没有直接从细胞检测其RNA表达量的方法，也不知道单个细胞间葡萄糖转运蛋白1基因表达量的变化。

发明内容

针对现有技术中的上述缺陷，本发明的主要目的在于提供一种检测葡萄糖转运蛋白1基因分析的方法，能够作为检测循环肿瘤细胞中单细胞水平的葡萄糖转运蛋白1基因表达的检测和研究之方法，将精准医学技术从基因水平提高到单细胞基因水平。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种检测葡萄糖转运蛋白1基因分析的方法，包括如下步骤：

1)分离提取单个细胞；

2)由所述单个细胞合成待检测基因的cDNA，所述待检测基因包含葡萄糖转运蛋白1基因；

3)PCR预扩增所述待检测基因；

4)定量PCR检测所述待检测基因的RNA表达量。

5)将待检测基因按不同细胞和/或不同基因分类，比较各待检测基因之间的RNA表达量的变化，获得单个细胞相关基因定量数据。

作为进一步的优选，所述步骤1)中，从血液中，分离提取单个细胞，所述细胞为循环肿瘤细胞。

作为进一步的优选，所述步骤2)中，所述单个细胞，用细胞分解液处理分解细胞膜后，合成待检测基因的cDNA。

作为进一步的优选，所述步骤2)中，所述待检测基因还包括GAPDH，Beta Acting，UBB，RPS11，RPS18，CD45，EpCAM及CK8/18/19的基因。

作为进一步的优选，所述步骤3)中，所述PCR预扩增葡萄糖转运蛋白1的PCR扩增引物分别为：正向引物：ACGGGTCGCCTCATGCT；反向引物：TGTAGAACTCCTCGATCACCTTCTG。

作为进一步的优选，所述步骤4)中，所述定量PCR检测时，葡萄糖转运蛋白1表达水平分析的定量PCR所用引物分别为：正向引物：ACGGGTCGCCTCATGCT；反向引物：TGTAGAACTCCTCGATCACCTTCTG；探针：CTCCCTGCAGTTTGGCTACAACACTGGA。