[发明专利]一种靶向EGFR和CD19双靶点的嵌合抗原受体方法

权利要求书

1.一个mCAR结构，其特征在于：

(1)一段掩盖肽结构；

(2)抗原特异性识别区域；

(3)跨膜区域；

(4)一种或一种以上的共刺激因子区域；

(5)胞内信号区域。

2.权利要求1所述的一段掩盖肽序列为QGQSGQCISPRGCPDGPYVMY。

3.权利要求1所述的抗原识别区域为scFv片段。

4.权利要求3所述的scFv片段包括针对EGFR的scFv和针对CD19的scFv。

5.权利要求1所述的掩盖肽结构和特异性识别区域通过蛋白酶剪切点和两段链接片段(linker)连接。

6.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：

(1)含有依次连接的抗EGFR单链抗体的编码序列、抗CD19单链抗体的编码序列、人IgG4铰链区的编码序列、人CD28跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。

7.如权利要求6所述的多核苷酸序列，其特征在于，

所述多核苷酸序列在所述CD8信号肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1-63位多核苷酸所示；和/或

所述多核苷酸序列在所述Mask信号肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第64-126位多核苷酸所示；和/或

所述抗EGFR单链抗体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第205-528位多核苷酸所示；和/或

所述抗CD19单链抗体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第991-1725位多核苷酸所示；和/或

所述人IgG4铰链区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1726-1761位多核苷酸所示；和/或

所述人CD28跨膜区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1765-1845位多核苷酸所示；和/或

所述人41BB胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1846-1971位多核苷酸所示；和/或

所述人CD3ζ胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1972-2307位多核苷酸所示。

8.一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：

(1)含有依次连接的抗EGFR单链抗体、抗CD19单链抗体、人IgG4铰链区、人CD28跨膜区、人41BB胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白的编码序列；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

优选地，所述抗EGFR单克隆抗体为C225。

9.如权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一个或多个特征：

所述融合蛋白在所述CD8信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；

所述Mask信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第22-42位氨基酸所示；

所述抗EGFR单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第69-310位氨基酸所示；

所述抗CD19单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第331-575位氨基酸所示；

所述人IgG4铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第576-587位氨基酸所示；

所述人CD28跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第589-615位氨基酸所示；

所述人41BB胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第616-657位氨基酸所示；

所述人CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第658-769位氨基酸所示。