[发明专利]一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法在审
| 申请号： | 201810950848.9 | 申请日： | 2018-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN109055473A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 王胜锋;黄毅;曾红宇;许岗 | 申请（专利权）人： | 湖南宝利士生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/02 | 分类号： | C12P33/02;C12P13/04 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所 43114 | 代理人： | 张伟;魏娟 |
| 地址： | 410000 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 熊去氧胆酸 氨基酸 超滤膜分离 酶催化反应 混合酶液 技术合成 溶液体系 透析液 酶法 偶联 湿粉 浓缩 葡萄糖 鹅去氧胆酸 合成步骤 环境友好 金属还原 酶利用率 有机溶剂 通过层 酮酸 | ||
1.一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将鹅去氧胆酸和α-酮酸置于含7α-HSDH和DAADH及NADP的溶液体系中进行酶催化反应，得到含7-KLCA和D-氨基酸的酶反应液；
2)将含7-KLCA和D-氨基酸的酶反应液采用超滤膜分离，膜内为浓缩的混合酶液，膜外透析液经过调解pH至3.0～6.0进行结晶，过滤分离，得到7-KLCA湿粉和滤液；
3)所述滤液调节pH至5～9后，采用树脂进行层析处理，得到D-氨基酸；
4)所述7-KLCA湿粉置于含葡萄糖、NADP、7β-HSDH及GDH溶液体系中进行酶催化反应，得到含熊去氧胆酸的酶反应液；
5)将含熊去氧胆酸的酶反应液采用超滤膜分离，膜内为浓缩的混合酶液，膜外透析液调解pH至3.0～6.0进行结晶，过滤分离，得到熊去氧胆酸。
2.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤1)中，
α-酮酸用量为鹅去氧胆酸摩尔量的1～2倍；
7α-HSDH用量为鹅去氧胆酸质量的0.4～1.0倍*1Mu/kg；
DAADH用量为鹅去氧胆酸质量的0.4～1.0倍*1Mu/kg；
NADP用量为鹅去氧胆酸质量的1‰～5‰。
3.根据权利要求2所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：所述α-酮酸具有式1结构：
其中，R为脂肪烃基或芳基。
4.根据权利要求2所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：所述鹅去氧胆酸在溶液体系中的质量百分比浓度为4～8％。
5.根据权利要求1～4任一项所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤1)中的酶催化反应条件为：温度为20～30℃，pH为8.0～9.0。
6.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤2)和步骤3)中超滤膜的孔径在5K～20K之间。
7.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：所述树脂包括离子交换树脂或大孔吸附树脂。
8.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤4)中，
葡萄糖用量为鹅去氧胆酸摩尔量的1.2～1.5倍；
7β-HSDH用量为鹅去氧胆酸质量的0.5～1.0倍*1Mu/kg；
GDH用量为鹅去氧胆酸质量的1.0～2.0倍*1Mu/kg；
NADP用量为鹅去氧胆酸质量的1‰～5‰。
9.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤4)中，7-KLCA湿粉在溶液体系中的浓度为4～6％。
10.根据权利要求1、7～9任一项所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤4)中，酶催化反应的条件：温度为20～30℃，pH为7.5～8.0。
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