[发明专利]一种适用于鲤鱼三倍体细胞生长的无血清培养基及其应用

权利要求书

1.一种适用于鲤鱼三倍体细胞生长的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包括DMEM基础培养基、培养添加剂和抗生素，所述培养添加剂中各成分及含量为：重组人胰岛素样生长因子-1为0.21-0.35μg、重组人碱性成纤维细胞生长因子0.24-0.33μg、血小板源性生长因子0.20-0.27μg、牛血清白蛋白4.71-5.90mg、牛转铁蛋白6.30-7.51mg、纤粘连蛋白0.81-1.32mg、非必需氨基酸1.90-2.51mg和4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.303-2.402g，所述含量为各成分在每升无血清培养基中的含量。

2.根据权利要求1所述的适用于鲤鱼三倍体细胞生长的无血清培养基，其特征在于，所述培养添加剂中各成分及含量为：重组人胰岛素样生长因子-1为0.30μg、重组人碱性成纤维细胞生长因子0.30μg、血小板源性生长因子0.22μg、牛血清白蛋白5.3mg、牛转铁蛋白6.8mg、纤粘连蛋白1.0mg、非必需氨基酸2.2mg和4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.383g，所述含量为各成分在每升无血清培养基中的含量。

3.权利要求1或2所述的无血清培养基在鲤鱼三倍体细胞培养中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述鲤鱼三倍体细胞培养方法如下：

1)原代细胞的培养：采用组织块贴壁法对三倍体鲤鱼细胞进行原代细胞的培养；

2)传代细胞培养法：长满单层后进行传代培养，用胰蛋白酶消化液消化细胞系，弃掉消化液，加入完全培养液，将细胞吹散成单个后继续培养，细胞贴壁后换液去除死细胞；长满单层后继续传代培养；

3)无血清培养基培养：传代至鲤鱼三倍体细胞性状稳定，将细胞置于无血清培养基中培养。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤1)所述组织块 贴壁法对三倍体鲤鱼细胞进行原代细胞的培养是指将三倍体鲤鱼尾鳍组织经灭菌后，23℃倒置培养12h，然后加入完全培养液正置培养。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤2)所述胰蛋白酶消化液中胰蛋白酶质量分数为0.25％，消化时间为2min。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤3)中鲤鱼三倍体细胞培养是置于细胞板中，每个孔中接种细胞1x10⁵个，加入2.5ml无血清培养基，23℃培养，每天换液。