[发明专利]一种抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗，其特征在于，弱毒疫苗以TVBMV弱毒突变体为基础，TVBMV弱毒突变体中嵌入了可诱导对黄瓜花叶病毒产生交叉保护的有效基因片段，所述的有效基因片段包括黄瓜花叶病毒的2b基因；所述的2b基因的核苷酸序列如Seq ID No.19所示；

所述的TVBMV弱毒突变体由pCamTVBMV在HC-Pro 序列中进行四个位点突变获得，所述的位点突变为：52位的精氨酸突变为谷氨酸，198位的天冬氨酸突变为赖氨酸；第250位的异亮氨酸突变为天冬氨酸，251位的谷氨酰胺突变为谷氨酸。

2.一种如权利要求1所述的抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建TVBMV弱毒突变体；

（2）获得可诱导对黄瓜花叶病毒产生交叉保护的2b基因片段；

（3）将得到的2b基因片段插入TVBMV弱毒突变体，获得抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以黄瓜花叶病毒的基因组为模板，利用PCR技术扩增得到2b基因片段，然后插入到TVBMV弱毒突变体的多克隆位点中，获得含有2b基因片段的弱毒疫苗。

4.一种含有如权利要求1所述的抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗的重组菌。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌包括转入了弱毒疫苗的农杆菌。

6.一种如权利要求1所述的抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗在防治黄瓜花叶病毒强毒株系侵染植物方面的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，通过农杆菌浸润法将获得的抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗接种到寄主植物，寄主植物生长正常。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在接种所述的抗黄瓜花叶病毒的弱毒疫苗到寄主植物后第15天接种黄瓜花叶病毒强毒株系，测定交叉保护效果，保护效率达到75％。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征为，所述的植物为双子叶植物。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的植物为烟草。