[发明专利]黄柏提取物的定量指纹图谱及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种黄柏提取物的定量指纹图谱检测方法，包括采用高效液相色谱法对黄柏提取物进行检测，其中，色谱条件包括：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1体积％三氟乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5ml·min^-1，柱温25～35℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于200,000。

2.如权利要求1所述的检测方法，其中，梯度洗脱过程中，流动相B的比例变化为：0～25min，13体积％乙腈；25～42min，13体积％～35体积％乙腈；42～50min，35体积％～95体积％乙腈；50～51min，95体积％～13体积％乙腈；51～60min，13体积％乙腈。

3.如权利要求1所述的检测方法，其中，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1体积％三氟乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B；梯度洗脱，流速1.0ml·min^-1；柱温30℃；检测波长284nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于200,000。

4.如权利要求1所述的检测方法，其中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为Agilent SB C₁₈，规格型号为：4.6*250mm、5μm。

5.如权利要求1-4中任一项所述的检测方法，还包括以下步骤：

(1)黄柏提取物的制备：取黄柏饮片，加8～12体积倍量水，浸泡0.5～1小时，加热提取0.2～1小时，即一煎；一煎后药渣加入黄柏饮片8～12倍量的水，提取0.2～1小时，即二煎；合并两煎药液，减压浓缩至相对密度1.00～1.15的浓缩液；浓缩液真空冷冻干燥，得冻干粉，将冻干粉进一步粉碎，过100目筛，得黄柏提取物；

(2)供试品溶液的制备：取黄柏提取物0.1g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加60体积％甲醇水溶液25～75ml，超声提取10～40分钟，放冷至室温，用60体积％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(3)色谱峰指认用对照品溶液的制备：取绿原酸对照品、黄柏碱对照品、木兰花碱对照品、药根碱对照品、小檗碱对照品适量，精密称定，分别加60体积％甲醇水溶液制成色谱峰指认用对照品溶液；

(4)含量测定用对照品溶液的制备：取黄柏碱对照品、小檗碱对照品精密称定，分别加60体积％甲醇水溶液制成含量测定用对照品溶液；

(5)测定：分别精密吸取步骤(3)色谱峰指认用对照品溶液、步骤(4)含量测定用对照品溶液、以及步骤(2)供试品溶液各2～10μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟内的色谱图；计算黄柏提取物中黄柏碱和小檗碱的百分含量(分别以盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱计)，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.130723版对图谱进行处理，即得黄柏提取物的定量指纹图谱。