[发明专利]一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法

说明书

本发明公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法；所述试剂盒内包括荧光素标记的NGAL抗体溶液、碱性磷酸酶标记的NGAL抗体溶液、包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液、NGAL校准品和发光底物溶液；本发明的试剂盒将免疫磁微粒技术和化学发光技术相结合，提供了一种接近均相的反应体系，让连接标记示踪物的NGAL抗体与连接桥连物的NGAL抗体先与待检测抗体反应，形成双抗原夹心结构的复合物；由于在形成双抗原夹心复合物的过程中，与标记抗原的都是小分子物质，其空间位阻远远小于磁性微球的空间位阻，能够促进抗原‑抗体结合反应充分进行，使得灵敏度、精密度、检测范围等检测性能大大提高。

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，特别涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

背景技术

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)生理状态下是一种生长因子，主要参与了早期肾脏上皮的发生、生长。在正常组织包括肾脏，肺，胃及结肠的上皮组织中表达量较低。在发生缺血性和毒性肾损伤过程中，肾小管上皮细胞中的NGAL将显著增加，在开始的两个小时内，尿液和血液中NGAL水平将显著增加，因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物。

NGAL也是反映肾脏慢性损害的一种有潜力的新标记物，在慢性肾脏病(chronickidney disease，CKD)患者中，NGAL能确切反映肾脏损害的程度，是CKD进展的一个强力和独立的风险指标。

目前中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测方法多采用免疫学方法。免疫学检测技术利用抗原、抗体特异性反应原理检测机体内待测物质的技术。放射免疫检测、荧光免疫检测、酶联免疫检测及化学发光检测技术逐渐发展成熟，并逐步取代了传统的免疫沉淀、免疫凝聚等技术，免疫学检测技术的发展使临床检测检验发生了巨大的变化：可检测项目剧增、检测灵敏度和特异度更高，自动化程度增加。尤其是后期发展的化学发光免疫检测技术进一步提高了检测的灵敏度和特异度等检测性能，为疾病的定量检测、诊断、治疗提供了直观的资料。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对急性肾损伤、慢性肾脏病等疾病的诊断具有无可替代的参考作用。目前我国批准上市的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂多为国产，采用的检测方法学多为酶免和化学发光。酶免检测法在检测灵敏度、检测线性范围等方面远不及化学发光检测法。此外化学发光还具有底物危害小、有效期长、干扰因素少、自动化程度高等优势。因此，在面对成分复杂的临床待测样品，化学发光表现更胜一筹。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成的一定颗粒大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度块、效率高、重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学形状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓缩或纯化。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种将磁分离技术和化学发光技术相结合，简单快速，结果准确的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，所述试剂盒内包括荧光素标记的 NGAL抗体溶液、碱性磷酸酶标记的NGAL抗体溶液、包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液、 NGAL校准品和发光底物溶液；

所述荧光素标记的NGAL抗体溶液是将NGAL抗体加入到含有荧光素的pH为7-9的Tris-HCl缓冲液反应制备而成；

所述碱性磷酸酶标记的NGAL抗体溶液由碱性磷酸酶与NGAL抗体通过交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯连接而成；

所述包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液是将荧光素抗体与含有羧基活性基团的磁微粒混合反应而成；