[发明专利]抑制素A检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种抑制素A检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。解决现有的抑制素A检测试剂盒发光反应速度慢，灵敏度低，线性范围窄，成本高的问题。该试剂盒包括：链霉亲和素化磁珠悬浮液、吖啶酯标记的抑制素A抗体和生物素标记抑制素A抗体。本发明还提供一种抑制素A检测试剂盒的制备方法。由于该试剂检测原理为双抗夹心法，分别由吖啶酯标记的抗体及生物素标记进行检测，不仅增加了发光率同时扩大了反应级，大大提高了试剂的特异性及检测速度。

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种抑制素A检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

抑制素是由女性卵巢的颗粒细胞和男性睾丸的塞尔托利细胞分泌的异二聚体糖蛋白激素。抑制素选择性地抑制垂体促卵泡激素(FSH)的分泌，同时在生殖腺还进行自身的旁分泌活动。经过完全处理的抑制素分子的分子量大约是32kD，它包括两个不同的链(α和β)，这两个链通过双硫键共价连接。前体是一个α亚单位的高分子量形式也出现在流动滤泡液和血清中。此外，还出现了游离α亚单位形式，它不与β亚单位相连接，并且是缺乏抑制素的生物活性的。抑制素A(INH-A/Inhibin A)包括个一个α亚单位和一个βA亚单位。一些已经发表的报告指出抑制素A可以用于人体生理生殖学的研究，对抑制素A的测定可以作为监控卵巢功能的内分泌指标。

免疫分析中，抗原-抗体免疫复合物的分离往往比较繁琐、费时，常常是信噪比低的原因，目前检测抑制素A的试剂盒普遍存在检测低限灵敏度不高、线性范围较窄的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的抑制素A检测试剂盒发光反应速度慢，灵敏度低，线性范围窄，成本高的问题，而提供一种抑制素A检测试剂盒及其制备方法。

本发明首先提供一种抑制素A检测试剂盒，该试剂盒包括：

链霉亲和素化磁珠悬浮液

吖啶酯标记的抑制素A抗体

生物素标记抑制素A抗体

优选的是，所述的链霉亲和素化磁珠悬浮液中的磁珠的粒径为0.05～3μm。

优选的是，所述的吖啶酯标记的抑制素A抗体中，吖啶酯与抑制素A抗体的摩尔比为1:(3～20)。

优选的是，所述的生物素标记抑制素A抗体中，生物素与抑制素A抗体的摩尔比为1:(5～20)。

优选的是，所述的试剂盒还包括化学发光底物液及清洗液，所述化学发光底物液包括A液和B液。

优选的是，所述A液为硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液，所述的清洗液为PB。

优选的是，所述的试剂盒还包括校准品和质控品：校准浓度分别为0pg/mL，10pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、2500pg/mL。

本发明还提供一种抑制素A检测试剂盒的制备方法，该方法包括：

步骤一：链霉亲和素化磁珠悬浮液的制备

1)将氯化铁和氯化亚铁在水中溶解混匀后，加入氨水，在50-70℃下反应3-5h，得到磁性微球；

2)将步骤1)得到的磁性微球、PEG4000、氨水和正硅酸乙酯在60-65℃搅拌反应14h-18h，得到改性后的磁性微球；

3)将步骤2)得到的改性后的磁性微球、氨水、四甲基氢氧化铵TMA和3－氨丙基三甲氧基硅烷，在室温搅拌反应14h-18h，得表面修饰氨基的磁性微球；

4)将步骤3)得到修饰氨基的磁性微球和TMA、戊二醛在室温下搅拌反应30-40min，然后在加入SA，37℃搅拌反应14h-18h，在加入谷氨酸和BSA继续反应1-2h，得到链霉亲和素化磁珠悬浮液；