[发明专利]抑制素A检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

链霉亲和素化磁珠悬浮液

吖啶酯标记的抑制素A抗体

生物素标记抑制素A抗体。

2.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述的链霉亲和素化磁珠悬浮液中的磁珠的粒径为0.05～3μm。

3.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述的吖啶酯标记的抑制素A抗体中，吖啶酯与抑制素A抗体的摩尔比为1:(3～20)。

4.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述的生物素标记抑制素A抗体中，生物素与抑制素A抗体的摩尔比为1:(5～20)。

5.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括化学发光底物液及清洗液，所述化学发光底物液包括A液和B液。

6.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述A液为硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液，所述的清洗液为PB。

7.根据权利要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括校准品和质控品：校准浓度分别为0pg/mL，10pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、2500pg/mL。

8.根据权要求1所述的一种抑制素A检测试剂盒的制备方法，其特征在于，该方法包括：

步骤一：链霉亲和素化磁珠悬浮液的制备

1)将氯化铁和氯化亚铁在水中溶解混匀后，加入氨水，在50-70℃下反应3-5h，得到磁性微球；

2)将步骤1)得到的磁性微球、PEG4000、氨水和正硅酸乙酯在60-65℃搅拌反应14h-18h，得到改性后的磁性微球；

3)将步骤2)得到的改性后的磁性微球、氨水、四甲基氢氧化铵TMA和3－氨丙基三甲氧基硅烷，在室温搅拌反应14h-18h，得表面修饰氨基的磁性微球；

4)将步骤3)得到修饰氨基的磁性微球和TMA、戊二醛在室温下搅拌反应30-40min，然后在加入SA，37℃搅拌反应14h-18h，在加入谷氨酸和BSA继续反应1-2h，得到链霉亲和素化磁珠悬浮液；

步骤二：吖啶酯标记的抑制素A抗体的制备

将抑制素A抗体放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入吖啶酯溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存；

步骤三：生物素标记抗体的制备

取抑制素A抗体，pH6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～3h，再转入室温继续反应10～30min，最后加入赖氨酸反应10～30min，经纯化，加入等体积甘油和NaN₃或ProClin300，得到偶联标记物标记的抑制素A抗体。

9.根据权要求8所述的一种抑制素A检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的步骤一中氯化铁和氯化亚铁的摩尔比为2：1。

10.根据权要求8所述的一种抑制素A检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的步骤二中的封闭液为赖氨酸。