[发明专利]检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯的方法

说明书

本发明属于检测分析领域，涉及一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯的方法，包括：(1)将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品混合，固液分离，得到液相物；(2)从液相物中分离出有机相；(3)任选地，对有机相除水并除杂，得待测液；(4)用气相色谱‑质谱联用仪检测有机相或者待测液，得检测结果；(5)根据检测结果定性或定量计算样品中葫芦巴内酯；步骤(4)中，检测时气相色谱升温程序为：在55℃～65℃下保持1～3分钟，然后以3℃/分钟～6℃/分钟的速率升至155℃～170℃，保持1～3分钟，然后以17℃/分钟～25℃/分钟速率升温至245℃～255℃，保持8～13分钟。本发明方法检测的准确度高、重复性好。

技术领域

本发明属于检测分析领域，具体涉及一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯的方法。

背景技术

葫芦巴内酯(CAS 28664-35-9)属于内酯类化合物，具有极强气味，作为特征香味物质存在于葫芦巴籽和独活草中，也是人造枫槭糖浆的主要香味成分之一。葫芦巴内酯广泛存在于糖蜜、陈年朗姆、陈年清酒、白酒、雪莉酒和风干菌菇中，其能够穿透人体屏障，因此，食用含有葫芦巴内酯的食物后，人体的汗液和尿液中会散发枫槭糖浆的味道，此外，患有支链酮酸尿症(Maple Syrup Urine Disease，一种常染色体隐性遗传病)的病人，其体内可自发产生葫芦巴内酯并随尿液代谢。

葫芦巴内酯的沸点为184℃，属于半挥发性成分。目前所报道的检测方法多用于检测葫芦巴提取物中的葫芦巴内酯，而不适用于检测烟草制品或者烟用香精香料中的葫芦巴内酯，主要有如下几个原因：

第一，葫芦巴内酯的香味阈值非常低，空气中仅为0.02ng/L，水中0.3μg/L；为了不影响卷烟的吸味，烟草制品或烟用香精香料中葫芦巴内酯的用量也很少，检测阈值较低，这导致准确测定烟草制品或烟用香精香料中的葫芦巴内酯含量变得较为困难；

第二，不同于饮品、化妆品等检测对象，烟草制品的成分组成非常复杂，含成千上万种成分，如糖、生物碱、氨基酸、多酚、色素等等，复杂成分通过会造成检测干扰，而烟草制品中葫芦巴内酯的检测阈偏偏又很低，这加大了准确测定烟草制品中葫芦巴内酯的难度。

目前还未出现能准确测定烟草制品或烟用香精香料中葫芦巴内酯含量的方法。

发明内容

本发明提供了一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯的方法，该方法的准确度高、重复性好。在此基础上，本发明还提供了一种试剂盒及其在检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯中的应用。

本发明第一方面涉及一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中葫芦巴内酯的方法，包括如下步骤：

(1)将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品混合，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物；

(2)从步骤(1)得到的液相物中分离出有机相(例如分离出上层的有机相)；

(3)任选地，对步骤(2)得到的有机相除水并除杂，得到待测液；

(4)采用气相色谱-质谱联用仪检测步骤(2)得到的有机相或者步骤(3)得到的待测液，得到检测结果；

(5)根据步骤(4)得到的检测结果定性或定量计算样品中的葫芦巴内酯；

步骤(4)中，检测时气相色谱的升温程序为：在55℃～65℃(例如58℃、60℃、63℃)下保持1～3分钟(例如1.5分钟、2分钟、2.5分钟)，然后以3℃/分钟～6℃/分钟(例如4℃/分钟、5℃/分钟)的速率升至155℃～170℃(例如158℃、160℃、165℃、167℃)，保持1～3分钟(例如1.5分钟、2分钟、2.5分钟)，然后以17℃/分钟～25℃/分钟(例如19℃/分钟、20℃/分钟、23℃/分钟)速率升温至245℃～255℃(例如248℃、250℃、253℃)，保持8～13分钟(例如10分钟、11分钟、12分钟)。