[发明专利]一种胶原-丝素蛋白-壳聚糖/黄芪多糖工程皮肤三维支架的制备方法

权利要求书

1.一种胶原-丝素蛋白-壳聚糖/黄芪多糖工程皮肤三维支架的制备方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：

1）将胶原蛋白与丝素蛋白分别溶于蒸馏水中，配成3.0~4.0%的胶原蛋白水溶液以及1.0~2.0%的丝素蛋白水溶液中；

2）将胶原蛋白水溶液与丝素蛋白水溶液按照溶质蛋白质量比1:1~5:1混合，在将制备好的黄芪多糖/壳聚糖微球加入到混合液中，充分搅拌混匀；

3）将上述含有微球的混合溶液加至事先做好的模具容器内，-30~-20℃预冻成型，然后-65~-55℃真空干燥48h~72h，获得的工程皮肤三维支架。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，黄芪多糖/壳聚糖微球的制备方法包括以下的步骤：

1）将壳聚糖固体，50℃水浴条件下，加至1~5%的冰乙酸溶液中，30~50 rpm搅拌，使壳聚糖完全溶解，获得壳聚糖-冰乙酸溶液；

2）将黄芪多糖，加至制备好的壳聚糖-乙酸溶液中，搅拌使其完全溶解，获得混合溶液；

3）在烧杯中加入含有1~2%体积百分比的Span-80的液体石蜡作为油相，将壳聚糖混合溶液逐滴加入到油相，50℃水浴条件下，30~50 rpm搅拌使其乳化，并维持10~30 min；

4）待乳化结束后，向溶液中加入戊二醛；50℃水浴条件下，30~50 rpm搅拌2~4 h后，将反应物转移至离心管，静置离心，弃上层液，石油醚洗涤沉淀2~4次；

5）将洗涤好的混合物进行真空抽滤，同时用异丙醇淋洗，预期获得橘黄色固体粉末，即为黄芪多糖/壳聚糖微球。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，胶原蛋白的制备方法如下：

1）取新鲜的牛腹，剔除肌肉、脂肪和筋膜，用三蒸水反复冲洗；

2）取适量处理的牛键剪成碎块，用0.1%的Na₂C0₃浸泡2 h，再用三蒸水冲洗5次；

3）将牛键碎块移入研钵，倒入适量液氮充分冷冻，然后用组织匀聚机将其打成牛腱粉末，-20℃下保存备用；

4）取适量牛键粉末，加入0.5%乙酸溶液加1%胰蛋白酶溶液4℃下充分溶胀、消化24h以上，然后加入几滴H₂O₂，充分混匀后静置10-15 min；加入3%乙酸1000ml，充分混匀后，布氏漏斗过滤，将未溶胀的牛腱颗粒过滤掉；

5）溶胀物于离心机中离心，2000 rpm/min，15min以除去不溶物；

6）以5% NaCl溶液盐析，离心，2000 rpm/min，5min，收集沉淀；沉淀物于3%乙酸中充分溶胀，未溶胀牛腱颗粒再溶胀后上述步驟；4℃下三蒸水中透析72h，每12h换水一次；透析后的胶原，经冷冻冻干后于4℃下保存备用。