[发明专利]一种协同链黑菌素制备抗肿瘤纳米组合药物的方法

权利要求书

1.一种协同链黑菌素制备抗肿瘤纳米组合药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、载体的制备

(1)MSNs的制备

首先利用间苯二酚-甲醛树脂、福尔马林水溶液和NaOH水溶液制得酚醛树脂；然后将模板剂三嵌段共聚物PluronicF127溶解于蒸馏水中得到浓度为2％～10％的模板剂水溶液，并将pH调至6～8；在调节了pH值的模板剂水溶液中加入制得的酚醛树脂，在60℃下以320rpm搅拌1.5～2h，然后加入40mL水，反应12～14小时；将得到的溶液用3倍体积的水稀释，再转移到高压釜中，115℃下加热24小时，最后将所得产物进行离心收集，并用蒸馏水洗涤后干燥得到孔径为3～5nm的MSNs；

(2)双层介孔的碳-氧化硅复合核-壳结构纳米球的合成

采用法在MSNs上涂覆一层无孔二氧化硅壳(nSiO₂)，然后采用表面活性剂辅助的溶胶-凝胶法在氨溶液中涂覆一层介孔二氧化硅，最后，用弱碱性溶液选择性蚀刻中间无定形二氧化硅层，获得均匀的棘状核-壳纳米结构，在600℃下，N₂气中煅烧，使内部聚合物芯碳化，得到纳米球载体；

步骤二、载体的表面修饰

(1)载体的表面氧化

用体积比为3∶1的H₂SO4和HNO₃制成的高浓度强酸处理纳米球载体，并用水洗涤至中性，再真空干燥得氧化载体，然后通过二亚胺活化的酰胺化反应将聚乙烯亚胺共价键接合到氧化后的纳米球载体上；

在氧化载体上接枝聚乙烯亚胺的方法为：将20mg氧化的载体分子溶解于2-(4-吗啉代)乙磺酸的40mL缓冲水溶液中，25℃下加入EDC和NHS后放置0.5小时；将分散在2-(4-吗啉代)乙磺酸溶液中的PEI加入到活化的氧化载体溶液中，在25℃下搅拌24小时，使PEI共价键接合到氧化后的纳米载体球上；最后，用水重复洗涤材料数次，除去过量的EDC、NHS和PEI，并在60℃下将PEI接枝的载体真空干燥12小时；

(2)连接来那度胺分子

准备两份二甲基亚砜溶液，在其中一份中混合来那度胺，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，25℃下搅拌0.5小时形成溶液A，同时，将连接了PEI的氧化载体分子分散在另一份DMSO中形成溶液B，然后，将溶液B加入到溶液A中，搅拌，再将得到的固体离心并依次用DMSO、水和乙醇洗涤，最后在60℃下真空干燥12小时；其中，PEI是聚乙烯亚胺的简称，DMSO是二甲基亚砜的简称；

步骤三、抗肿瘤组合药物的上载

将纳米颗粒载体悬浮于含磷酸盐缓冲液的STN水溶液中，然后在黑暗中搅拌，离心收集纳米颗粒，并用缓冲液洗涤直至上清液变为无色，之后进行过滤、干燥；将干燥后含有STN分子的纳米颗粒载体悬浮于含磷酸盐缓冲液的TEMPOL水溶液中，然后在黑暗中搅拌，离心收集纳米颗粒，并用缓冲液洗涤直至上清液变为无色，再次进行过滤、干燥得到颗粒状产物。