[发明专利]一种用于环介导等温扩增的试剂及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种用于环介导等温扩增的试剂，其包括纳米颗粒、二硫苏糖醇、肽牛血清、氯化四甲基铵、海藻糖中的至少一种；本发明还涉及一种含有上述试剂的试剂盒及其应用，该试剂盒还包括：10×恒温buffer、dNTP混合物、MgSO₄、Bst DNA聚合酶、指示剂以及水，在由该试剂盒制得的环介导等温扩增反应体系中各组分的终浓度如下：纳米颗粒0‑10mg/mL；二硫苏糖醇0‑10M；肽牛血清0‑10g/mL；氯化四甲基铵0‑100mM；海藻糖0‑50mM；dNTP混合物1.0‑3.0mM；MgSO₄4‑10mM；Bst DNA聚合酶0.1‑0.5U/μL。本发明在解决LAMP试剂高成本问题的同时确保检测质量，本发明所述的试剂盒具有与进口试剂相同的检测效果，其灵敏度、特异性和稳定性均可满足临床实验需求，但检测成本可以大幅度降低，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于核酸扩增技术领域，具体涉及一种用于环介导等温扩增的试剂，以及含有该试剂的试剂盒和该试剂盒的应用。

背景技术

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种不同于常规PCR的体外核酸基因扩增新技术。LAMP主要利用两对或三对特异性引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，在恒温条件下的连续快速扩增。与传统的PCR技术相比，此技术具有更高的灵敏度、特异性和扩增效率，抗抑制物能力强，对核酸模板质量要求低，因此可以大大简化核酸抽提的步骤，此技术可以在1h内扩增出10⁹～10¹⁰倍靶序列拷贝，检测结果的观察方式灵活多样，可以是：电泳法、浊度法(直接裸眼目视或使用专业设备)、染料法(通过反应体系颜色的变化直接判断结果)、实时荧光曲线法(类似于SYBR实时PCR法)，可以满足各种不同检测平台的要求，目前的应用已日益广泛，已应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域。在医学方面，LAMP技术已应用于细菌类病原微生物的检测、病毒类病原微生物的检测、真菌类微生物的检测、急性传染病的快速现场检测、肿瘤基因检测等，该技术在即时检测(POCT)方面的应用具有重要的价值。

然而，当前的LAMP试剂市场主要被国外公司(例如日本荣研公司)垄断，一方面原因是：LAMP专利的技术垄断，另一方面不可忽视的原因是：进口LAMP试剂的售价太高，售价约80元-100元/人份，成本远高于普通PCR法(3元-10元)，极大的限制了该技术在国内的推广(国产的LAMP试剂盒多因质量欠佳而难以被客户所接受)。虽然目前为了打破垄断，越来越多的研究趋向于将高成本的进口试剂国产化，然而均未取得很好的成效。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种用于环介导等温扩增的试剂，以及含有该试剂的试剂盒和该试剂盒的应用，本发明在解决LAMP试剂高成本问题的同时确保检测质量，本发明所述的试剂盒具有与进口试剂相同的检测效果，其灵敏度、特异性和稳定性均可满足临床实验需求，但检测成本可以大幅度降低。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个目的是提供一种用于环介导等温扩增的试剂，其包括纳米颗粒、二硫苏糖醇(DTT)、肽牛血清(BSA)、氯化四甲基铵(TMAC)、海藻糖中的至少一种。

为了进一步优化上述试剂，本发明采取的技术措施还包括：

进一步地，所述试剂包括纳米颗粒；或者，所述试剂包括纳米颗粒、二硫苏糖醇(DTT)、肽牛血清(BSA)；或者，所述试剂包括纳米颗粒、二硫苏糖醇(DTT)、肽牛血清(BSA)、氯化四甲基铵(TMAC)。

进一步地，所述纳米颗粒的材质包括金、银、二氧化硅、聚苯乙烯或石墨烯。更优选为：金纳米颗粒。

进一步地，所述纳米材颗粒的表面带正电荷或不带电荷，其直径为0-1000nm；更优选为1～200nm；更优选为2～10nm。