[发明专利]肿瘤细胞膜包覆的纳米材料及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种肿瘤细胞膜包覆的负载葡萄糖氧化酶的纳米材料，其特征在于，由介孔纳米颗粒、肿瘤细胞膜，和葡萄糖氧化酶组成，其中介孔纳米颗粒负载葡萄糖氧化酶，肿瘤细胞膜包覆负载葡萄糖氧化酶的介孔纳米颗粒，所述介孔纳米颗粒为介孔二氧化硅，即MSN，其获得的肿瘤细胞膜包覆的负载葡萄糖氧化酶的纳米材料为CMSN-Gox，所述CMSN-Gox由以下方法制备，具体包括以下步骤：

1）、负载葡萄糖氧化酶的介孔二氧化硅纳米颗粒的制备：在pH值为7.4的PBS缓冲液中介孔二氧化硅纳米颗粒与葡萄糖氧化酶混合，两者浓度均为0.05mg/ml，室温下通过磁力搅拌器搅拌过夜，使介孔二氧化硅纳米颗粒负载葡萄糖氧化酶；

2）、肿瘤细胞膜的制备：将B16-F10细胞在直径10厘米培养皿中孵化，细胞数量大约为1×10⁸个，然后用细胞刮板分离，在700 g离心处理5分钟；收集到的细胞在预冻的pH 为7.4的PBS缓冲液重悬，在600 g 离心5分钟；获得的细胞颗粒悬浮在低渗的溶液中，该低渗溶液包含0.05μl/μl氟化膜蛋白提取试剂缓冲液和0.05μl/μl苯甲基磺酰氟, 根据说明书的指示，在冰浴中孵化10 - 15分钟，将溶液中的细胞反复冻融，在4℃，700 g离心10 min，上清液14000 g离心30 min，收集细胞膜碎片，利用Avanti挤出机，在400纳米的聚碳酸酯多孔膜上，对肿瘤细胞的细胞膜进行了11次挤压；

3）、CMSN-GOx的制备：在pH值为7.4的PBS缓冲液中介孔二氧化硅纳米颗粒与肿瘤细胞膜混合，两者浓度均为0.05mg/ml；采用Avanti微型挤出机，在200纳米聚碳酸酯多孔膜上进行了11次挤压，然后用离心机去除多余的步骤2）制得的肿瘤细胞的细胞膜，新制备的CMSN-GOx在4℃ PBS中过夜。

2.权利要求1所述的肿瘤细胞膜包覆的负载葡萄糖氧化酶的纳米材料CMSN-GOx在制备治疗肿瘤药物的应用。

3.有效量的包含权利要求1所述的肿瘤细胞膜包覆的负载葡萄糖氧化酶的纳米材料CMSN-Gox联合有效量的PD-1单克隆抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PD-1单克隆抗体购买自ebioscience公司。