[发明专利]一种方格星虫体腔液中抗菌肽的制备方法

权利要求书

1.一种方格星虫体腔液中抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

清洗吐沙的步骤：挑选新鲜生命力旺盛的方格星虫，用除菌海水清洗后；将方格星虫喂养于淡盐水中，每隔1h换水喂养，待方格星虫吐尽泥沙；

收集体腔液的步骤：将吐尽泥沙的方格星虫取出，用无菌水冲洗，用滤纸吸收体表多余水分，持镊子夹住星虫前段，使之垂直于消毒离心管中，在虫体末端剪一小口，使体液自然流出，逐条收集；

超声破碎的步骤：将收集的体腔液进行超声破碎裂解；

离心过滤的步骤：再将超声处理后的体腔液离心，用醋酸纤维膜过滤除菌，放入-20℃冰箱保存，得到体腔液蛋白粗提物；

酶解的步骤：将体腔液蛋白粗提物分别采用蛋白酶酶解，进行酶解后，酶解液放入沸水中灭酶，将酶解液离心，收集上清液，冷冻干燥，得到方格星虫体腔液目标抗菌肽。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在清洗吐沙的步骤中，所述淡盐水的质量浓度为24‰。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在超声破碎的步骤中，所述超声破碎的条件为：超声波温度为20-30℃、超声波频率为37-53kHz、超声波功率60-100W、超声波时间1-3min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在离心过滤的步骤中，所述离心的条件为：在4℃、3000-6000r/min条件下离心10-30min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在离心过滤的步骤中，所述醋酸纤维膜的膜孔径为0.1-0.22μm。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在酶解的步骤中，所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或两种以上的混合物。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在酶解的步骤中，所述酶解条件为pH2.0-10.0、温度30-50℃、酶解时间为0.5-1.5h，加酶量为250-350U/g。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在酶解的步骤中，酶解液放入沸水中灭酶10-15min，将酶解液在13000r/min条件下离心10min。