[发明专利]一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条及制备方法

说明书

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条及制备方法。一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条，由样品垫、结合垫、NC膜、吸收垫四部分组成，并按一定组装顺序依次粘贴在PVP底板上；其中，结合垫上包被有纳米复合物标记燕窝糖蛋白抗体，NC膜上的检测线和控制线分别包被有燕窝糖蛋白抗体和羊抗兔IgG溶液；采用双抗体夹心法，通过将试纸条放入金标试纸阅读分析仪进行信号转化获取响应值，制作标准曲线后，实现了对燕窝糖蛋白的定量检测，具有灵敏度高，特异性强，稳定性好，反应时间短，操作方便等优点，可用于燕窝真伪鉴别的现场快速检测。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条及制备方法。

背景技术

燕窝为雨燕科(Apodidae)动物金丝燕及多种同属燕类用唾液与绒羽等混合凝结所筑成的巢窝，在我国，主要以福建、海南、广东沿海一带居多。现代医学研究发现，燕窝主要成分中，唾液酸为燕窝中最有价值的成分之一，主要分为游离型唾液酸和结合型唾液酸，后者主要以糖蛋白的形式存在。燕窝具有丰富的营养及药用价值，随着燕窝销量的增长和原料价格昂贵等原因，不法商贩为牟取暴利，对燕窝进行掺假，给消费者带来了巨大的经济损失和身心危害，并严重扰乱了市场食品安全秩序。因此，建立燕窝产品的真伪鉴别质量体系，维护大众的经济利益和市场食品安全秩序显得尤为重要。

燕窝的真伪鉴别和检测有多种方法，主要包括燕窝理化性质检测，仪器分析法还有酶联免疫分析法等。其中，仪器分析法主要包括高效液相色谱、气相色谱、液质联用等，其仪器价格昂贵，实验分析时间长，对待测样品的要求高且无法用于现场检测，其实际应用受到一定的限制。而酶联免疫法操作过程较繁琐，检测时间较长且需要专门的操作人员和实验室等缺点，无法满足快速检测的需求。免疫层析试纸条生物传感器具有生产成本低，不需要专业人员操作，使用方便快速等优点，因此可用于燕窝真伪鉴别快速检测。

纳米金易于合成和进行表面修饰、颜色鲜艳、制作成本不高，因此作为传统的标记物被应用于免疫层析试纸条传感器，数分钟内即可获得响应信号。但是，由于受到纳米金信号强度的限制，导致纳米金免疫层析试纸条的检测灵敏度不够理想，通常只能进行视觉定性或者半定量的分析。为了有效地提高和改善免疫试纸条的检测灵敏度和分析性能，急需开发新型的纳米材料作为免疫层析试纸条标记物。

纳米二氧化硅具有生物相容性好、承载能力强和表面易功能化的特点，已经成为生物、药剂等多个领域的研究热点。以纳米二氧化硅为基体材料进行目的性的表面修饰，将大量的纳米金附载在纳米二氧化硅表面，制备纳米金-纳米二氧化硅复合物（AuNP-SiNR）。与单一纳米金相比，纳米复合物能够有效提高免疫反应的效率和检测线上纳米金的富集量，显著增强响应信号，从而达到提高灵敏度的目的。

此纳米复合物试纸条，以燕窝中的特征性成分——燕窝糖蛋白为目标分析物，采用双抗体夹心法实现对燕窝的真伪鉴别。当滴加适量含有糖蛋白样品的缓冲溶液在样品垫时，溶液在毛细作用下流动到结合垫上，与纳米金-纳米二氧化硅标记燕窝糖蛋白抗体复合物（AuNP-SiNR-Ab）发生特异性结合形成免疫复合物。接着继续向前流动到检测线，此时被检测线上的糖蛋白抗体所捕获，由于纳米复合物的富集，在检测线上呈现第一条肉眼可见的深紫色。同时，游离的AuNP-SiNR-Ab继续向前流动到控制线，被控制线上的羊抗兔IgG所截获，在控制线上形成第二条肉眼可见的深紫色。当空白组即不含糖蛋白样品溶液滴加到样品垫时，只有控制线显紫色，而测试线不显色。如果检测线和控制线皆不显色时，则该试纸条失效。最后通过金标试纸阅读分析仪进行信号转化获取响应值，制作标准曲线后，能够对燕窝糖蛋白进行定量检测。相比于肉眼观察，该实验数据更具有准确性和客观性。目前，检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条尚无报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条及制备方法，具有灵敏度高，特异性强，检测时间短，操作方便快捷，无需专业人员操作等特点，可用于燕窝真伪鉴别的快速检测。