[发明专利]一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条，其特征在于：由样品垫、结合垫、NC膜、吸收垫四部分组成，并按一定组装顺序依次粘贴在PVP底板上，其中，结合垫上包被有纳米复合物标记燕窝糖蛋白抗体，NC膜上的检测线和控制线分别包被有燕窝糖蛋白抗体和羊抗兔IgG溶液。

2.根据权利要求1所述的一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条，其特征在于：所述燕窝糖蛋白抗体为多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条，其特征在于：所述纳米复合物标记燕窝糖蛋白抗体为纳米金-纳米二氧化硅标记燕窝糖蛋白抗体的复合物。

4.如权利要求1所述的一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条的制备方法，其特征包括以下步骤：

（1）制备燕窝糖蛋白多克隆抗体：以燕窝中提取出来的燕窝糖蛋白作为抗原，免疫新西兰大白兔，按常规操作方法获取抗血清并采用抗原亲和层析柱加以纯化；

（2）制备纳米金-纳米二氧化硅复合物：采用硅醇盐水解法制备分散均一的纳米二氧化硅，采用硼氢化钠还原法制备纳米金颗粒，通过纳米金颗粒的吸附及金种子的生长制备分散状态良好的纳米复合物；

（3）制备纳米金-纳米二氧化硅复合物标记燕窝糖蛋白抗体：通过静电吸附作用和疏水作用，将燕窝糖蛋白抗体固定在纳米金-纳米二氧化硅复合物表面，制得纳米金-纳米二氧化硅复合物标记燕窝糖蛋白抗体；

（4）制备NC膜：使用喷金仪将燕窝糖蛋白抗体喷在NC膜上，形成检测线，距离检测线上方2-3mm处喷上4 mg/mL羊抗兔IgG溶液形成控制线，然后放在室温自然晾干，4 ℃冰箱保存备用；

（5）组装试纸条：将样品垫、结合垫、NC膜和吸收垫依次粘贴在PVP底板上并轻轻按压，每个组成部位应有2 mm的重叠部分，然后用裁条机将粘贴好的部分裁成3 mm的试纸条，保存在4 ℃冰箱中；

（6）样品检测方法：将100μL待测样品缓冲溶液滴在样品垫上，反应10 min后，再次滴入50μL的缓冲溶液进行冲洗，5min后，将试纸条放入金标试纸阅读分析仪，通过相应软件对其产生的信号进行分析，绘制标准曲线，根据标准曲线求得待测样品的含量。

5.根据权利要求4所述的一种检测燕窝糖蛋白的纳米复合物试纸条的制备方法，其特征在于：步骤（3）纳米金-纳米二氧化硅复合物标记燕窝糖蛋白抗体的制备方法为：取2 mL纳米金-纳米二氧化硅复合物，用0.1 mol/L的Na₂CO₃溶液调节pH至9，加入50 μL的燕窝糖蛋白抗体做为检测抗体，室温下震荡60 min，接着加入100 μL的10% BSA溶液继续反应30min，然后溶液以6000 r/min离心5 min，所得沉淀用PBS+1%BSA溶液清洗，最后将沉淀溶解于含有0.1 mol/L Na₃PO₄·12H₂O，10%蔗糖和0.25% Tween-20的缓冲溶液中。