[发明专利]一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用有效
| 申请号: | 201810911435.X | 申请日: | 2018-08-12 |
| 公开(公告)号: | CN109001188B | 公开(公告)日: | 2021-09-14 |
| 发明(设计)人: | 王建平;张腾 | 申请(专利权)人: | 河北农业大学 |
| 主分类号: | G01N21/76 | 分类号: | G01N21/76;G01N30/02 |
| 代理公司: | 保定市燕赵恒通知识产权代理事务所 13121 | 代理人: | 周献济 |
| 地址: | 071000 河北*** | 国省代码: | 河北;13 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 金刚烷胺 金刚 乙胺 特异性 分子 印迹 聚合物 化学 发光 试剂盒 检测 方法 应用 | ||
1.一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物,其特征在于由如下方法制备,以下原料按物质的量计:
(a)将1份假分子模板金刚烷、3~6份功能单体甲基丙烯酸、20~30份的引发剂偶氮二异丁腈和20~30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿中,60~70℃振荡反应10~12小时;
(b)将上述反应后所得的固体颗粒物放在弗氏提取器中,用提取液连续回流12~24小时,将所述假分子模板金刚烷提取出来;
(c)将步骤(b)反应后的固体颗粒物烘干后,得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物。
2.如权利要求1所述的分子印迹聚合物,其特征在于,所述的步骤(a)中所用的溶剂为氯仿,步骤(b)中所用的提取液为甲醇与乙酸的混合溶液,并且甲醇与乙酸的体积比为9:0.5~2。
3.一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性检测的化学发光试剂盒,其特征在于该化学发光试剂盒以如权利要求1或2所述的分子印迹聚合物为识别试剂,以金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物为信号试剂,以鲁米诺和过氧化氢为化学发光试剂,以4-(咪唑-1-基)苯酚为增强剂,根据发光强度与待测物浓度具有反比关系对待测物浓度做出检测。
4.如权利要求3所述的化学发光试剂盒,其特征在于,所述金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物通过如下方法制备:
(a)将金刚烷胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌溶解得A液,将辣根过氧化物酶溶解于磷酸盐缓冲溶液中,得B液;
(b)将所述溶液A滴加至所述溶液B中,充分搅拌得到溶液C;
(c)向溶液C中逐滴加入质量分数为25%的戊二醛水溶液,室温反应6小时;
(d)将步骤(c)所得液体置于透析袋中,在4℃用磷酸盐缓冲液透析3天即可。
5.利用权利要求3或4所述的化学发光试剂盒对金刚烷胺和金刚乙胺的检测方法,其特征在于包括如下步骤:
(a)将权利要求1或2所述的分子印迹聚合物悬浮于重量百分比为0.3~2%聚乙烯醇溶液中,然后加入到聚苯乙烯滴定板的小孔中,放置1~2小时;
(b)将待检测的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物或样品提取液和所述的金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物加入到不透明的聚苯乙烯滴定板的小孔中,室温放置5~50分钟;
(c)对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤,清除杂质和没有被捕获的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物;
(d)将鲁米诺、过氧化氢和4-(咪唑-1-基)苯酚加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中,将该聚苯乙烯滴定板置于化学发光仪或多功能酶标仪中,读取各小孔的化学发光值。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤(c)中,用乙醇对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤。
7.如权利要求3所述的化学发光试剂盒在同时检测金刚烷胺和金刚乙胺领域的应用。
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